Multi-colour DNA-qPAINT reveals how Csk nano-clusters regulate T-cell receptor signalling
Multi-colour DNA-qPAINT reveals how Csk nano-clusters regulate T-cell receptor signalling
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多色 DNA-qPAINT 揭示 Csk 纳米簇如何调节 T 细胞受体信号传导
DOI：
10.1101/857516
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Simoncelli S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Simoncelli S
酪氨酸激酶Lck的负调控元件被Csk磷酸化下调T细胞受体诱导的信号传导。作为组成性活跃，Csk空间组织负责调节这种信号相互作用。在这里，我们使用化学计量准确，多路复用，单分子超分辨率显微镜（DNA-qPAINT）来成像Csk的纳米级空间结构和涉及其膜缔合的两个结合伙伴- PAG和TRAF 3。结合一个新开发的共聚类分析框架，我们提供了一个强大的资源，解剖调控的时空组织的信号通路。我们发现Csk在质膜附近形成纳米级簇，这些簇在刺激后丢失并在稍后的时间点重新招募。出乎意料的是，这些簇并不直接与膜上的PAG共定位，而是提供了一个现成的单体库来下调信号传导。通过产生CRISPR/Cas9敲除的T细胞，我们的数据还鉴定了蛋白酪氨酸磷酸酶非受体22型（PTPN 22）对于Csk纳米簇再募集和突触PAG群体的维持是必不可少的。
Phosphorylation of the negative regulatory element of the tyrosine kinase Lck by Csk down-modulates T-cell receptor induced signalling. Being constitutively active, Csk spatial organization is responsible for regulating this signalling interaction. Here, we used stoichiometrically accurate, multiplexed, single-molecule super-resolution microscopy (DNA-qPAINT) to image the nanoscale spatial architecture of Csk and two binding partners implicated in its membrane association – PAG and TRAF3. Combined with a newly developed co-clustering analysis framework, we provide a powerful resource for dissecting signalling pathways regulated by spatio-temporal organisation. We found that Csk forms nanoscale clusters proximal to the plasma membrane that are lost post-stimulation and re-recruited at later time points. Unexpectedly, these clusters do not directly co-localise with PAG at the membrane, but instead provide a ready pool of monomers to down-regulate signalling. By generating CRISPR/Cas9 knock-out T-cells, our data also identify that protein tyrosine phosphatase non-receptor type 22 (PTPN22) is essential for Csk nanocluster re-recruitment and for maintenance of the synaptic PAG population.
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发表时间：
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Biochimica et biophysica acta
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P. Otáhal;S. Pata;P. Angelisová;V. Hořejší;T. Brdicka
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T. Brdicka
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Stauss, Hans J.
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