Facilitating the hyphenation of CIEF and MALDI-MS for two-dimensional separation of proteins.
Facilitating the hyphenation of CIEF and MALDI-MS for two-dimensional separation of proteins.
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DOI：
10.1002/elps.201000085
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发表时间：
2010-08
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Liu, Shaorong
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cheng, Chang;Lu, Joann J.;Wang, Xiayan;Roberts, Jonathan;Liu, Shaorong
CIEF和MALDI-MS都经常用于蛋白质分析，但两者的联用没有按比例进行研究。其中一个主要原因是电感耦合等离子体发射光谱仪中的添加剂(如载体两性离子和洗涤剂)严重抑制了MALDI-MS信号，阻碍了两者的联用。在本文中，我们开发了一种简单的方法来缓解上述信号抑制效应。我们首先在MALDI-MS靶上沉淀1微米L水，向水滴中输送一部分CIEF分离的蛋白质(约0.1微米L)，蒸发溶剂，在样点中加入0.5微米L基质，干燥基质，然后将靶板移到MALDI-TOF-MS上进行质谱分析。我们优化了液滴体积和激光烧蚀区域。在优化的条件下，信噪比提高了2-10倍。我们还将这种方法应用于标准蛋白和载脂蛋白A-I的二维分离，载脂蛋白A-I是一种在大肠杆菌细胞中表达的膜蛋白。
Both CIEF and MALDI-MS are frequently used in protein analysis, but hyphenation of the two is not investigated proportionally. One of the major reasons is that the additives (such as carrier ampholytes and detergent) in CIEF severely suppress the MALDI-MS signal, which hampers the hyphenation of the two. In this paper, we develop a simple means to alleviate the above signal-suppressing effect. We first deposit 1 µL of water onto a MALDI-MS target, deliver a fraction of CIEF-separated protein (~0.1 µL) to the water droplet, evaporate the solvent, add 0.5 µL of MALDI matrix to the sample spot, dry the matrix, and move the target plate to a MALDI-TOF-MS for mass spectrum measurement. We optimize the droplet volume and the laser-ablation region. Under the optimized conditions, we improve the signal to noise ratio by 2–10 fold. We also apply this method for two-dimensional separations of standard proteins and Apolipoprotein A-I, a membrane protein expressed in E. Coli cells.
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影响因子：
15
作者：
Pasa-Tolic, L;Jensen, PK;Smith, RD
通讯作者：
Smith, RD
影响因子：
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作者：
Shen, YF;Xiang, F;Smith, RD
通讯作者：
Smith, RD
影响因子：
7.4
作者：
MULLER, O;FORET, F;KARGER, BL
通讯作者：
KARGER, BL
DOI：
10.1016/0021-9673(91)80095-x
发表时间：
1991-10-18
期刊：
JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
影响因子：
--
作者：
ZHU, MD;RODRIGUEZ, R;WEHR, T
通讯作者：
WEHR, T
影响因子：
7.4
作者：
TANG, Q;HARRATA, AK;LEE, CS
通讯作者：
LEE, CS