Episodic live imaging of cone photoreceptor maturation in GNAT2-EGFP retinal organoids.
Episodic live imaging of cone photoreceptor maturation in GNAT2-EGFP retinal organoids.
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DOI：
10.1242/dmm.050193
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发表时间：
2023-11-01
影响因子：
4.3
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
荧光报告多能干细胞衍生的视网膜类器官是研究细胞类型特异性发育和疾病表型的有力工具。当与实时成像相结合时，它们能够直接和重复观察发育中的视网膜组织内的细胞行为。在这里，我们通过在鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基α转导素2（GNAT 2）的N末端插入增强型绿色荧光蛋白（EGFP）编码序列和2A自切割肽，通过对WTC 11-mTagRFPT-LMNB 1人诱导多能干细胞（iPSC）进行CRISPR/Cas9基因组编辑来产生人视锥光感受器报告细胞系。在从这些iPSC产生的视网膜类器官中，GNAT 2-EGFP等位基因强烈且专门标记未成熟和成熟视锥。水凝胶固定的视网膜类器官的间歇共聚焦实时成像允许跟踪单个视锥的形态成熟>18周，并显示线粒体的内段积累和从第126天至第153天以每天12.2 μm3的速度生长。 固定化GNAT 2-EGFP锥报告类器官为研究人类锥发育和疾病提供了有价值的工具。总结：我们产生了人类视锥光感受器荧光报告细胞系和视网膜类器官，并通过间歇性实时成像捕获了个体视锥成熟，证明了类器官作为视锥发育和疾病模型的实用性。
Fluorescent reporter pluripotent stem cell-derived retinal organoids are powerful tools to investigate cell type-specific development and disease phenotypes. When combined with live imaging, they enable direct and repeated observation of cell behaviors within a developing retinal tissue. Here, we generated a human cone photoreceptor reporter line by CRISPR/Cas9 genome editing of WTC11-mTagRFPT-LMNB1 human induced pluripotent stem cells (iPSCs) by inserting enhanced green fluorescent protein (EGFP) coding sequences and a 2A self-cleaving peptide at the N-terminus of guanine nucleotide-binding protein subunit alpha transducin 2 (GNAT2). In retinal organoids generated from these iPSCs, the GNAT2-EGFP alleles robustly and exclusively labeled immature and mature cones. Episodic confocal live imaging of hydrogel immobilized retinal organoids allowed tracking of the morphological maturation of individual cones for >18 weeks and revealed inner segment accumulation of mitochondria and growth at 12.2 μm3 per day from day 126 to day 153. Immobilized GNAT2-EGFP cone reporter organoids provide a valuable tool for investigating human cone development and disease. Summary: We generated a human cone photoreceptor fluorescent reporter line and retinal organoids, and captured individual cone maturation through episodic live imaging, demonstrating the utility of the organoids as cone development and disease models.
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影响因子：
5.9
作者：
Gagliardi G;Ben M'Barek K;Chaffiol A;Slembrouck-Brec A;Conart JB;Nanteau C;Rabesandratana O;Sahel JA;Duebel J;Orieux G;Reichman S;Goureau O
通讯作者：
Goureau O
DOI：
10.1002/cne.24170
发表时间：
2019-01-01
期刊：
The Journal of comparative neurology
影响因子：
--
作者：
Hendrickson A;Zhang C
通讯作者：
Zhang C
影响因子：
5.2
作者：
Nazlamova, Liliya;Cassidy, Emma-Jane;Lakowski, Jorn
通讯作者：
Lakowski, Jorn
DOI：
10.1242/dev.189746
发表时间：
2020-12-24
期刊：
Development (Cambridge, England)
影响因子：
--
作者：
O'Hara-Wright M;Gonzalez-Cordero A
通讯作者：
Gonzalez-Cordero A
影响因子：
4.4
作者：
Browne AW;Arnesano C;Harutyunyan N;Khuu T;Martinez JC;Pollack HA;Koos DS;Lee TC;Fraser SE;Moats RA;Aparicio JG;Cobrinik D
通讯作者：
Cobrinik D