Genetic modification of primary human B cells generates translationally-relevant models of high-grade lymphoma
Genetic modification of primary human B cells generates translationally-relevant models of high-grade lymphoma
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原代人类 B 细胞的基因修饰产生了高级别淋巴瘤的翻译相关模型
DOI：
10.1101/618835
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Caeser R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Caeser R
弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL) 的测序研究已鉴定出数百个反复改变的基因。然而，目前仍不清楚这些突变是否以及如何单独或组合地导致淋巴瘤发生。解决这一问题的现有策略主要利用细胞系，但细胞系受到其初始特征和随后对长期体外培养的适应的限制。在这里，我们描述了一种共培养系统，该系统能够实现原代人生发中心 B 细胞的离体扩增和病毒转导。 CRISPR/Cas9 技术的结合能够对 DLBCL 中反复突变的基因进行高通量功能询问。使用 BCL2 的骨架与 BCL6 或 MYC，我们确定了促进生长甚至完全转化为合成工程 DLBCL 模型的协同遗传改变。由此产生的肿瘤可以在体内扩展并顺序移植，提供一个可扩展的平台来测试假定的癌症基因并创建突变导向的定制淋巴瘤模型。
Sequencing studies of diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) have identified hundreds of recurrently altered genes. However, it remains largely unknown whether and how these mutations may contribute to lymphomagenesis, either individually or in combination. Existing strategies to address this problem predominantly utilize cell lines, which are limited by their initial characteristics and subsequent adaptions to prolonged in vitro culture. Here, we describe a co-culture system that enables the ex vivo expansion and viral transduction of primary human germinal center B cells. Incorporation of CRISPR/Cas9 technology enables high-throughput functional interrogation of genes recurrently mutated in DLBCL. Using a backbone ofBCL2with eitherBCL6orMYC, we identify co-operating genetic alterations that promote growth or even full transformation into synthetically engineered DLBCL models. The resulting tumors can be expanded and sequentially transplanted in vivo, providing a scalable platform to test putative cancer genes and to create mutation-directed, bespoke lymphoma models.
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