A system for production and rapid purification of large amounts of the Shiga toxin/Shiga-like toxin I B subunit.
A system for production and rapid purification of large amounts of the Shiga toxin/Shiga-like toxin I B subunit.
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用于生产和快速纯化大量志贺毒素/志贺样毒素 I B 亚基的系统。
DOI：
10.1128/iai.58.9.2977-2982.1990
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发表时间：
1990
影响因子：
3.1
通讯作者：
Donohue-Rolfe,A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Calderwood,SB;Acheson,DW;Goldberg,MB;Boyko,SA;Donohue-Rolfe,A
我们构建了一个质粒表达载体（pSBC32），该载体在诱导型 trc 启动子的控制下编码志贺毒素/志贺样毒素 I 的 B 亚基。编码的 B 亚基被转运到周质空间，从而可以使用受体类似物亲和层析从周质提取物中一步纯化毫克量的该蛋白质。纯化的 B 亚基与志贺毒素多克隆抗血清和 B 亚基特异性单克隆抗体正常相互作用。在该系统中纯化的 B 亚基是五聚体（如天然全毒素），具有阻止志贺全毒素与 HeLa 细胞结合的生物活性。该表达系统可以快速纯化足量的志贺毒素 B 亚基，以尝试结晶或研究其作为疫苗的功效，无论是单独使用还是与适当的多糖抗原偶联。
We have constructed a plasmid expression vector (pSBC32) that encodes the B subunit of Shiga toxin/Shiga-like toxin I under control of the inducible trc promoter. The encoded B subunit is transported to the periplasmic space, allowing single-step purification of milligram amounts of this protein from periplasmic extracts by using receptor analog affinity chromatography. The purified B subunit interacts normally with both polyclonal antiserum to Shiga toxin and a monoclonal antibody specific for B subunit. B subunit purified in this system is pentameric (as in native holotoxin) and biologically active in blocking binding of Shiga holotoxin to HeLa cells. This expression system may allow rapid purification of sufficient amounts of Shiga toxin B subunit to attempt crystallization or to study its efficacy as a vaccine, either by itself or coupled to an appropriate polysaccharide antigen.
志贺氏菌腹泻的发病机制。
影响因子：
15.9
作者：
G. Keusch;G. Grady;L. Mata;J. Mciver
通讯作者：
J. Mciver
影响因子：
15.3
作者：
A. Donohue‐Rolfe;G. T. Keusch;Clark Edson;David THORLEY;M. Jacewicz
通讯作者：
M. Jacewicz