The host protein Staufen1 interacts with the Pr55Gag zinc fingers and regulates HIV-1 assembly via its N-terminus.
The host protein Staufen1 interacts with the Pr55Gag zinc fingers and regulates HIV-1 assembly via its N-terminus.
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DOI：
10.1186/1742-4690-5-41
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发表时间：
2008-05-22
期刊：
影响因子：
3.3
通讯作者：
DesGroseillers, Luc
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chatel-Chaix, Laurent;Boulay, Karine;Mouland, Andrew J.;DesGroseillers, Luc
新的感染性人类免疫缺陷1型病毒（HIV-1）的形成主要依赖于病毒结构多聚蛋白Pr 55 Gag的同源多聚化和宿主因子的募集。我们先前已经表明，双链RNA结合蛋白Staufen 1（Stau 1），可能通过其第三个双链RNA结合结构域（dsRBD 3）和Pr 55 Gag的核衣壳（NC）结构域之间的相互作用，通过影响Pr 55 Gag多聚化参与HIV-1组装。我们现在报告的Stau 1/Pr 55 Gag协会使用免疫共沉淀和活细胞生物发光共振能量转移（BRET）测定的精细映射。一方面，我们的研究结果表明，Stau 1-Pr 55 Gag相互作用需要在Pr 55 Gag的NC结构域中的两个锌指中的至少一个的完整性，而不是NC N-末端碱性区域的完整性。两个锌指的破坏极大地阻碍了Pr 55 Gag多聚化和病毒颗粒释放。与此同时，我们使用活细胞中的Pr 55 Gag/Pr 55 Gag BRET测定法测试了几种Stau 1缺失突变体影响Pr 55 Gag多聚化的能力。我们的研究结果表明，在Stau 1的N-末端的12个氨基酸的分子决定簇是必要的，以增加Pr 55 Gag多聚化和颗粒释放。然而，该区域不是Stau 1与病毒多聚蛋白Pr 55 Gag相互作用所必需的。这些数据强调了Stau 1是一种模块化蛋白，Stau 1通过1）其dsRBD 3和Pr 55 Gag锌指之间的相互作用和2）N末端内的调节结构域影响Pr 55 Gag多聚化，该调节结构域可以招募对于完成新的HIV-1衣壳至关重要的宿主机制。
The formation of new infectious human immunodeficiency type 1 virus (HIV-1) mainly relies on the homo-multimerization of the viral structural polyprotein Pr55Gag and on the recruitment of host factors. We have previously shown that the double-stranded RNA-binding protein Staufen 1 (Stau1), likely through an interaction between its third double-stranded RNA-binding domain (dsRBD3) and the nucleocapsid (NC) domain of Pr55Gag, participates in HIV-1 assembly by influencing Pr55Gag multimerization. We now report the fine mapping of Stau1/Pr55Gag association using co-immunoprecipitation and live cell bioluminescence resonance energy transfer (BRET) assays. On the one hand, our results show that the Stau1-Pr55Gag interaction requires the integrity of at least one of the two zinc fingers in the NC domain of Pr55Gag but not that of the NC N-terminal basic region. Disruption of both zinc fingers dramatically impeded Pr55Gag multimerization and virus particle release. In parallel, we tested several Stau1 deletion mutants for their capacity to influence Pr55Gag multimerization using the Pr55Gag/Pr55Gag BRET assay in live cells. Our results revealed that a molecular determinant of 12 amino acids at the N-terminal end of Stau1 is necessary to increase Pr55Gag multimerization and particle release. However, this region is not required for Stau1 interaction with the viral polyprotein Pr55Gag. These data highlight that Stau1 is a modular protein and that Stau1 influences Pr55Gag multimerization via 1) an interaction between its dsRBD3 and Pr55Gag zinc fingers and 2) a regulatory domain within the N-terminus that could recruit host machineries that are critical for the completion of new HIV-1 capsids.
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