Very fast CRISPR on demand.
Very fast CRISPR on demand.
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DOI：
10.1126/science.aay8204
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发表时间：
2020-06-12
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Ha T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Liu Y;Zou RS;He S;Nihongaki Y;Li X;Razavi S;Wu B;Ha T
CRISPR-Cas系统为可编程基因组编辑提供了多功能工具。在这里，我们开发了一种笼状RNA策略，允许Cas9结合DNA，但在光诱导激活之前不会切割。这种方法被称为非常快的CRISPR，可以在亚微米和秒级上产生双链断裂（DSBs）。同步切割改善了DNA修复的动力学分析，揭示细胞在几分钟内对cas9诱导的dsb做出反应，并且在DNA连接后可以保留MRE11。DNA损伤后H2AX的磷酸化速度超过每分钟100千碱基，最高可达30兆碱基。通过单细胞荧光成像，我们发现53BP1修复病灶形成和溶解的多个周期，第一个周期比随后的周期更长，其持续时间与修复抑制有关。成像引导的亚细胞Cas9激活进一步促进了单等位基因分辨率的基因组操作。总之，非常快速的CRISPR能够在空间、时间和基因组坐标上进行高分辨率的DNA修复研究。非常快速的按需CRISPR使DNA修复研究在空间、时间和基因组坐标上具有高分辨率。
CRISPR-Cas systems provide versatile tools for programmable genome editing. Here, we developed a caged RNA strategy that allows Cas9 to bind DNA but not cleave until light-induced activation. This approach, referred to as very fast CRISPR, creates doublestrand-breaks (DSBs) at submicron and seconds scales. Synchronized cleavage improved kinetic analysis of DNA repair, revealing that cells respond to Cas9-induced DSBs within minutes and can retain MRE11 after DNA ligation. Phosphorylation of H2AX after DNA damage propagated over 100 kilobases per minute, reaching up to 30 megabases. Using single cell fluorescence imaging, we characterized multiple cycles of 53BP1 repair foci formation and dissolution, with the first cycle taking longer than subsequent cycles and its duration modulated with inhibition of repair. Imaging-guided subcellular Cas9 activation further facilitated genomic manipulation with single allele resolution. Together, very fast CRISPR enables DNA repair studies at high resolution in space, time and genomic coordinates. Very fast CRISPR on demand enables DNA repair studies at high resolution in space, time and genomic coordinates.
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影响因子：
9.8
作者：
McQuin C;Goodman A;Chernyshev V;Kamentsky L;Cimini BA;Karhohs KW;Doan M;Ding L;Rafelski SM;Thirstrup D;Wiegraebe W;Singh S;Becker T;Caicedo JC;Carpenter AE
通讯作者：
Carpenter AE
影响因子：
16.8
作者：
Singh D;Wang Y;Mallon J;Yang O;Fei J;Poddar A;Ceylan D;Bailey S;Ha T
通讯作者：
Ha T
在酵母和哺乳动物中，异染色质对 γ-H2AX 修饰具有抵抗力。
DOI：
10.1083/jcb.200612031
发表时间：
2007-07-16
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Kim JA;Kruhlak M;Dotiwala F;Nussenzweig A;Haber JE
通讯作者：
Haber JE
影响因子：
16.6
作者：
Singh D;Sternberg SH;Fei J;Doudna JA;Ha T
通讯作者：
Ha T
影响因子：
5.3
作者：
Ding, Q;Reddy, YVR;Meek, K
通讯作者：
Meek, K