Complex Dependence of Escherichia coli-based Cell-Free Expression on Sonication Energy During Lysis.
Complex Dependence of Escherichia coli-based Cell-Free Expression on Sonication Energy During Lysis.
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DOI：
10.1021/acssynbio.3c00312
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发表时间：
2023-10-20
影响因子：
4.7
通讯作者：
Styczynski, Mark P.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Piorino, Fernanda;Styczynski, Mark P.
细胞裂解——例如通过超声或敲打头——是制备无细胞表达系统提取物的关键步骤。为了制造高蛋白质生产能力的提取物，标准做法是充分裂解细胞以彻底破坏膜，从而提取表达机制，但不降解该机制。在这里，我们研究了不同的超声能量输入对大肠杆菌提取物的蛋白质生产能力的影响。虽然已知存在特定于操作符的最佳超声能量输入，但我们的研究结果表明，从给定表达模板产生最大蛋白质输出的超声能量输入可能取决于质粒浓度、转录和翻译特征（如启动子）以及其他表达载体成分（如复制起源）。这些结果表明，超声方案不能标准化为单一的最佳，建议提高蛋白质产量的策略，更广泛地强调需要更好的指标和方案来表征细胞提取物。
Cell lysis—by sonication or bead beating, for example—is a key step in preparing extracts for cell-free expression systems. To create high protein-production capacity extracts, standard practice is to lyse cells sufficiently to thoroughly disrupt the membrane and thus extract expression machinery but without degrading that machinery. Here, we investigate the impact of different sonication energy inputs on the protein-production capacity of Escherichia coli extracts. While the existence of operator-specific optimal sonication energy inputs is widely known, our findings show that the sonication energy input that yields maximal protein output from a given expression template may depend on plasmid concentration, transcriptional and translational features (e.g., promoter), and other expression vector components (e.g., origin of replication). These results indicate that sonication protocols cannot be standardized to a single optimum, suggest strategies for improving protein yields, and more broadly highlight the need for better metrics and protocols for characterizing cell extracts.
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影响因子：
4.6
作者：
Kwon YC;Jewett MC
通讯作者：
Jewett MC
DOI：
10.3791/50762
发表时间：
2013-09-16
期刊：
Journal of visualized experiments : JoVE
影响因子：
--
作者：
Sun ZZ;Hayes CA;Shin J;Caschera F;Murray RM;Noireaux V
通讯作者：
Noireaux V
影响因子：
48
作者：
Gibson, Daniel G.;Young, Lei;Smith, Hamilton O.
通讯作者：
Smith, Hamilton O.
影响因子：
4.8
作者：
Takahashi, Melissa K.;Hayes, Clarmyra A.;Lucks, Julius B.
通讯作者：
Lucks, Julius B.
影响因子：
3.8
作者：
Jewett, MC;Swartz, JR
通讯作者：
Swartz, JR