CRISPR-Cas9 HDR system enhances AQP1 gene expression.
CRISPR-Cas9 HDR system enhances AQP1 gene expression.
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CRISPR-Cas9 HDR系统增强AQP1基因表达
DOI：
10.18632/oncotarget.22901
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发表时间：
2017-12-19
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Passineau MJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wang Z;Wang Y;Wang S;Zhang LR;Zhang N;Cheng Z;Liu Q;Shields KJ;Hu B;Passineau MJ
电离辐射（IR）是治疗头颈部癌性病变患者的主要治疗手段。在许多患者中，IR导致不可逆的和严重的唾液腺功能障碍或口干症。目前还没有有效的治疗方案来减少口干症的影响。最近，利用水特异性蛋白质水通道蛋白1（AQP 1）的唾液腺基因治疗已经引起了极大的兴趣，以潜在地纠正唾液腺功能障碍。在这项研究中，我们在HEK 293和MDCK细胞系中使用CRISPR-Cas9基因编辑沿着AQP 1的内源性启动子。巨细胞病毒（CMV）启动子的成功整合导致AQP 1基因转录和翻译显著增加。MDCK细胞系的其他功能实验证实，过表达的AQP 1增加了跨膜液流量，表明细胞内液流量增加。分析了设计的引导RNA序列的脱靶效应，并证明了对Cas9切割的高特异性。考虑到强大的DNA敲入的新方法的发展，我们的结果表明，内源性启动子替换可能是一个潜在的治疗唾液腺功能障碍。
Ionizing radiation (IR) isthe primarytherapeutic tool to treat patients with cancerous lesions located in the head and neck. In many patients, IR results in irreversible and severe salivary gland dysfunction or xerostomia. Currently there are no effective treatment options to reduce the effects of xerostomia. More recently, salivary gland gene therapy utilizing the water-specific protein aquaporin 1 (AQP1) has been of great interest to potentially correct salivary dysfunction. In this study, we used CRISPR-Cas9 gene editing along with the endogenous promoter of AQP1 within theHEK293 and MDCK cell lines. The successful integration of the cytomegalovirus (CMV) promoterresultedin a significant increase of AQP1 gene transcription and translation. Additionalfunctional experiments involvingthe MDCK cell line confirmedthat over-expressed AQP1increasedtransmembrane fluid flux indicative of increased intracellular fluid flux. The off-target effect of designed guided RNA sequence was analyzed and demonstrateda high specificity for the Cas9 cleavage. Considering the development of new methods for robust DNA knock-in, our results suggest that endogenous promoter replacement may be a potential treatment forsalivary gland dysfunction.
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影响因子：
64.8
作者：
Konermann S;Brigham MD;Trevino AE;Joung J;Abudayyeh OO;Barcena C;Hsu PD;Habib N;Gootenberg JS;Nishimasu H;Nureki O;Zhang F
通讯作者：
Zhang F
人多能干细胞中G2/M细胞周期阶段的富集增强了可自定义的内切酶的HDR介导的基因修复。
影响因子：
4.6
作者：
Yang D;Scavuzzo MA;Chmielowiec J;Sharp R;Bajic A;Borowiak M
通讯作者：
Borowiak M
影响因子：
5.6
作者：
Yabas M;Elliott H;Hoyne GF
通讯作者：
Hoyne GF
DOI：
10.1038/nrd.2016.238
发表时间：
2017-02
期刊：
Nature reviews. Drug discovery
影响因子：
--
作者：
Fellmann C;Gowen BG;Lin PC;Doudna JA;Corn JE
通讯作者：
Corn JE
影响因子：
3.4
作者：
Ropero, Paloma;Erquiaga, Sara;Martinez, Rafael
通讯作者：
Martinez, Rafael