Kinase activity and specificity assay using synthetic peptides.
Kinase activity and specificity assay using synthetic peptides.
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使用合成肽进行激酶活性和特异性测定
DOI：
10.1007/978-1-4939-2648-0_7
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发表时间：
2015
影响因子：
--
通讯作者：
Schulze
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schulze
蛋白激酶对底物蛋白的磷酸化可导致信号通路或代谢过程的激活或失活。准确理解蛋白激酶的活性和特异性是表征激酶功能的重要问题。在这里，我们描述了一个程序来研究激酶的活性和特异性，使用从植物材料和合成肽作为底物纯化的激酶-GFP复合物。磁性GFP珠粒允许从微粒体组分纯化受体样激酶-GFP复合物。然后将激酶-GFP复合物与ATP和合成肽一起孵育以进行激酶反应。然后通过质谱法鉴定和定量底物肽的磷酸化。
Phosphorylation of substrate proteins by protein kinases can lead to activation or inactivation of signaling pathways or metabolic processes. Precise understanding of activity and specificity of protein kinases are important questions in characterization of kinase functions. Here, we describe a procedure to study kinase activity and specificity using kinase-GFP complexes purified from plant material and synthetic peptides as substrates. Magnetic GFP beads allow purifying receptor-like kinase-GFP complexes from microsomal fractions. Kinase-GFP complexes are then incubated with ATP and the synthetic peptides for kinase reaction. Phosphorylation of substrate peptides is then identified and quantified by mass spectrometry.
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