Characterization of the stoichiometry of the complex formed by Staphylococcal LukSF and human C5aR receptor in living cells
Characterization of the stoichiometry of the complex formed by Staphylococcal LukSF and human C5aR receptor in living cells
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活细胞中葡萄球菌 LukSF 和人 C5aR 受体形成的复合物的化学计量表征
DOI：
10.1101/127514
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Haapasalo K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Haapasalo K
金黄色葡萄球菌瓦伦丁白血球蛋白(PVL)是一种致孔毒素，由两个蛋白亚基Luks和LukF组成。Luk与白细胞上的人C5a受体(HC5aR)结合可诱导LukF的二次结合和裂解复合体的组装。先前的分析表明，PVL由4+4的Luks/LukF亚基组成，但Luks、LukF和hC5aR之间的确切化学计量比尚不清楚。在这项研究中，我们测定了活的真核细胞中功能性LuKS/LukF-hC5aR复合体的化学计量学和时空动力学。通过使用快速全反射荧光(TIRF)和单分子光漂白分析，我们发现Luks-hC5aR四聚体形成于一簇受体中。当与hC5aR结合时，每个Luks亚基都与LukF结合，导致裂孔形成，同时受体从复合体中解离。我们的发现证实了异八聚体模型，但为整合的宿主细胞膜受体上的关键毒力因子组装的动力学提供了新的观点。
Staphylococcus aureusPanton Valentine Leukocidin (PVL) is a pore-forming toxin comprising protein subunits LukS and LukF. Binding of LukS to human C5a receptor (hC5aR) on leukocytes induces secondary binding of LukF and assembly of lytic complexes. Previous analysis suggests that PVL consists of 4-plus-4 LukS/LukF subunits but the exact stoichiometry between LukS, LukF and hC5aR is not yet known. In this study we determine the stoichiometry and spatiotemporal dynamics of functional LukS/LukF-hC5aR complexes in living eukaryotic cells. By using rapid total internal reflection fluorescence (TIRF) and single-molecule photobleaching analysis we found that tetrameric LukS-hC5aR complexes are formed within a cluster of receptors. Upon binding to hC5aR each LukS subunit binds LukF leading to lytic pore formation and simultaneous dissociation of receptors from the complex. Our findings corroborate a hetero-octamer model but provide a new view on the kinetics of crucial virulence factor assembly on integrated host cell membrane receptors.
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通讯作者：
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通讯作者：
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--
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通讯作者：
K. Yamashita;Y. Kawai;Yoshikazu Tanaka;N. Hirano;J. Kaneko;N. Tomita;M. Ohta;Y. Kamio;M. Yao;I. Tanaka