RNA Imaging with RNase-Inactivated Csy4 in Plants and Filamentous Fungi.

RNA Imaging with RNase-Inactivated Csy4 in Plants and Filamentous Fungi.
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在植物和丝状真菌中使用 RNase 灭活的 Csy4 进行 RNA 成像。

DOI:
10.1007/978-1-0716-0712-1_9
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发表时间:
2020
期刊:
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
影响因子:
--
通讯作者:
Burnett D
Burnett D
中科院分区:
--
文献类型:
--
作者:
Burnett D

文献摘要

参考文献

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rna的亚细胞定位可以在体内用由序列特异性rna结合蛋白(RBP)与荧光蛋白融合组成的遗传编码报告进行成像。基于识别RNA茎环的rbp,已经描述了几个这样的报告系统。在这里,我们描述了用细菌内切酶Csy4的失活突变体进行RNA标记成像,该突变体对其同源茎环的亲和力明显高于其他系统。这一特性使得只需将目标茎环的少量串联拷贝插入感兴趣的RNA即可进行敏感成像。
Subcellular localizations of RNAs can be imaged in vivo with genetically encoded reporters consisting of a sequence-specific RNA-binding protein (RBP) fused to a fluorescent protein. Several such reporter systems have been described based on RBPs that recognize RNA stem-loops. Here we describe RNA tagging for imaging with an inactive mutant of the bacterial endonuclease Csy4, which has a significantly higher affinity for its cognate stem-loop than alternative systems. This property allows for sensitive imaging with only few tandem copies of the target stem-loop inserted into the RNA of interest.
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