A Method for Conditional Regulation of Protein Stability in Native or Near-Native Form.
A Method for Conditional Regulation of Protein Stability in Native or Near-Native Form.
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DOI：
10.1016/j.chembiol.2020.09.004
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发表时间：
2020-12-17
影响因子：
8.6
通讯作者：
Wandless TJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Miyamae Y;Chen LC;Utsugi Y;Farrants H;Wandless TJ
在这里，我们报告了一种通过在不稳定结构域（DD）和受调节蛋白之间引入泛素变体来调节细胞蛋白水平的方法。当在缺乏稳定配体的情况下产生时，DD 占主导地位，整个融合蛋白逐渐被蛋白酶体降解。在稳定配体存在的情况下，融合蛋白是代谢稳定的，并成为丰富的泛素特异性蛋白酶的底物，释放天然或接近天然的目的蛋白。因此，该技术对于研究其正常功能需要游离 N 末端的蛋白质特别有用。此外，当细胞短暂暴露于稳定配体时，例如在接受单剂量药剂作为稳定配体的活体动物中，在稳定配体存在的情况下去除DD会导致调节蛋白的表达水平更高。控制细胞中蛋白质丰度而不干扰受调节蛋白质功能的能力是生物医学研究的宝贵工具。宫前等人。开发了一种使用不稳定结构域和泛素变体有条件调节天然或接近天然形式的蛋白质稳定性的方法。
Here, we report a method to regulate cellular protein levels by introducing a ubiquitin variant between a destabilizing domain (DD) and the regulated protein. When produced in the absence of a stabilizing ligand the DD dominates and the entire fusion protein is processively degraded by the proteasome. In the presence of the stabilizing ligand the fusion protein is metabolically stable and becomes a substrate for abundant ubiquitin-specific proteases, liberating a native, or a near-native protein-of-interest. This technique is thus particularly useful for the study of proteins whose free N-terminus is required for proper function. Additionally, removal of the DD in the presence of stabilizing ligand leads to higher expression levels of regulated protein when cells experience transient exposure to a stabilizing ligand, such as in a living animal receiving a single dose of a pharmacological agent as the stabilizing ligand. The ability to control protein abundance in cells without perturbing the function of the regulated protein is a valuable tool for biomedical research. Miyamae et al. developed a method to conditionally regulate the protein stability in native or near-native form using a destabilizing domain and ubiquitin variant.
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DOI：
10.1042/bj20080779
发表时间：
2008-11-01
期刊：
The Biochemical journal
影响因子：
--
作者：
Drag M;Mikolajczyk J;Bekes M;Reyes-Turcu FE;Ellman JA;Wilkinson KD;Salvesen GS
通讯作者：
Salvesen GS
影响因子：
46.9
作者：
Dantuma, NP;Lindsten, K;Masucci, MG
通讯作者：
Masucci, MG
源自人雌激素受体的不稳定结构域。
影响因子：
15
作者：
Miyazaki, Yusuke;Imoto, Hiroshi;Chen, Ling-Chun;Wandless, Thomas J.
通讯作者：
Wandless, Thomas J.
影响因子：
14.8
作者：
Chung HK;Jacobs CL;Huo Y;Yang J;Krumm SA;Plemper RK;Tsien RY;Lin MZ
通讯作者：
Lin MZ
影响因子：
82.9
作者：
Banaszynski, Laura A.;Sellmyer, Mark A.;Contag, Christopher H.;Wandless, Thomas J.;Thorne, Steve H.
通讯作者：
Thorne, Steve H.