Comparison of lentiviral vector titration methods.
Comparison of lentiviral vector titration methods.
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DOI：
10.1186/1472-6750-6-34
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发表时间：
2006-07-12
影响因子：
3.5
通讯作者：
Gijsbers R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Geraerts M;Willems S;Baekelandt V;Debyser Z;Gijsbers R
慢病毒载体是分裂细胞和非分裂细胞中稳定基因转移的有效载体。为了提高生物安全性和转基因表达，载体设计上的几项改进已经导致这些载体被批准用于临床研究。需要分析慢病毒载体生产质量、基因转移效率和治疗性基因表达程度的方法。我们比较了慢病毒载体滴定法测量pg p24/ml、RNA当量/ml、转导单位（TU/ml）或mRNA当量的方法。载体颗粒中基因组RNA的数量被证明是评估编码非荧光蛋白载体生产质量的可靠指标。然而，浓缩载体的RNA和p24滴度在预测转导效率方面相当差，因为基于瞬时转染的载体生产具有很高的可变性。此外，我们证明转基因mRNA水平与TU有很好的相关性，可以用于非荧光转基因的功能滴定。不同的滴定方法有特定的优点和缺点。根据实验装置的不同，一种滴定方法应优于其他方法。
Lentiviral vectors are efficient vehicles for stable gene transfer in dividing and non-dividing cells. Several improvements in vector design to increase biosafety and transgene expression, have led to the approval of these vectors for use in clinical studies. Methods are required to analyze the quality of lentiviral vector production, the efficiency of gene transfer and the extent of therapeutic gene expression. We compared lentiviral vector titration methods that measure pg p24/ml, RNA equivalents/ml, transducing units (TU/ml) or mRNA equivalents. The amount of genomic RNA in vector particles proves to be reliable to assess the production quality of vectors encoding non-fluorescent proteins. However, the RNA and p24 titers of concentrated vectors are rather poor in predicting transduction efficiency, due to the high variability of vector production based on transient transfection. Moreover, we demonstrate that transgenic mRNA levels correlate well with TU and can be used for functional titration of non-fluorescent transgenes. The different titration methods have specific advantages and disadvantages. Depending on the experimental set-up one titration method should be preferred over the others.
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影响因子：
46.9
作者：
Ikeda, Y;Takeuchi, Y;Collins, M
通讯作者：
Collins, M
影响因子：
5.1
作者：
Sastry, L;Johnson, T;Cornetta, K
通讯作者：
Cornetta, K
DOI：
10.1073/pnas.93.21.11382
发表时间：
1996-10-15
影响因子：
11.1
作者：
Naldini, L;Blomer, U;Verma, IM
通讯作者：
Verma, IM
影响因子：
56.9
作者：
Naldini, L;Blomer, U;Trono, D
通讯作者：
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影响因子：
46.9
作者：
Zennou, V;Serguera, C;Charneau, P
通讯作者：
Charneau, P