Secondary structure of acyl carrier protein as derived from two-dimensional 1H NMR spectroscopy.
Secondary structure of acyl carrier protein as derived from two-dimensional 1H NMR spectroscopy.
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酰基载体蛋白的二级结构源自二维 1H NMR 光谱。
DOI：
10.1021/bi00367a063
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发表时间：
1986
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Prestegard,JH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Holak,TA;Prestegard,JH
材料和方法用Rockand Cronan(1980)的方法从大肠杆菌B细胞(谷物加工)中分离ACP，并用二硫苏糖醇(DTT)将其还原为游离的巯基形式。将ACP样品通过较短的Cherex柱，然后是Sephadex G-25柱(5 mm磷酸二氢钾缓冲液)并冷冻干燥。高效液相色谱和核磁共振分析表明，这些样品中含有约10%的微量ACP等结构形式。样品被认为足够纯净，可用于核磁共振分析，因为人们认为10%的杂质不太可能给出可观察到的共振。事实证明，这在很大程度上是正确的。然而，在1个缩写的酰胺-C“H区存在一些弱的交叉峰：ACP，酰基载体蛋白；DTT，二硫苏糖醇；？EA-SH，/3-巯基乙胺；2D核磁共振，二维核磁共振；COSY，二维/相关核磁共振光谱；DQF-COSY，双量子过滤COSY；RELAYEDCOSY(RELAYEDCOSY)，接力相干转移光谱；NOE，nu-Clear Overhauser效应；NOESY，二维NOE光谱；ppm，百万分之；第{ij)天，残基I上的C“H质子和残基j\dgN上的酰胺质子之间的交叉弛豫连接性(Ij)，残基I上的CflH质子和残基j上的酰胺质子之间的交叉驰豫连接性；d^‘(t，j)，残基I上的酰胺质子和残基j上的酰胺质子之间的交叉驰豫连接性。
Materials and MethodsACP was isolated from E. coli B cells (Grain Processing) by using the method of Rockand Cronan (1980) and reduced with dithiothreitol (DTT) to the free sulfhydryl form. ACP samples were passed through a short Chelex column, followed by a Sephadex G-25 column (5 mM potassium phosphate buffer) and freeze-dried. HPLC and NMR analyses showed these samples to contain approximately 10% minor isostruc-tural forms of ACP. The samples were deemed sufficiently pure for NMR analysis since it was felt that the 10% con-taminants were unlikely to give observable resonances. This has proven to be largely correct. There are, however, a few weak cross-peaks present in the amide-C “H region of the1 Abbreviations: ACP, acyl carrier protein; DTT, dithiothreitol; ß-EA-SH,/3-mercaptoethylamine; 2D NMR, two-dimensional nuclear magnetic resonance; COSY, two-dimensional/-correlated NMR spectroscopy; DQF-COSY, double quantum filtered COSY; RELAYEDCOSY (RELAY), relayed coherence transfer spectroscopy; NOE, nu-clear Overhauser effect; NOESY, two-dimensional NOE spectroscopy; ppm, parts per million; day {ij), cross relaxation connectivity between the C “H proton on residue i and the amide proton on residue j\dgN (iJ), cross relaxation connectivity between a CflH proton on residue i and the amide proton on residue j; d^\¡(t, j), cross relaxation connectivity between the amide proton on residue i and the amide proton on residue j.
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K. Wüthrich
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--
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G. Drobny