Autonomy and robustness of translocation through the nuclear pore complex: a single-molecule study.
Autonomy and robustness of translocation through the nuclear pore complex: a single-molecule study.
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DOI：
10.1083/jcb.200806173
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发表时间：
2008-10-06
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kubitscheck U
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dange T;Grünwald D;Grünwald A;Peters R;Kubitscheck U
细胞核和细胞质之间的所有分子运输都是通过核膜内的核孔复合体（NPC）进行的。在本研究中，我们分析了核转运受体 kapα2、kapβ1、kapβ1ΔN44 和 kapβ2 以及模型转运底物 BSA-NLS 与 NPC 的相互作用，以使用单分子显微镜在活细胞中确定结合位点和动力学。重组转运受体和 BSA-NLS 通过 AlexaFluor 488 进行荧光标记，并显微注射到表达 POM121-GFP 作为核孔标记的活 HeLa 细胞的细胞质中。在漂白主要 GFP 荧光后，可以使用时间分辨率为 5 ms 的视频显微镜研究显微注射分子的相互作用，实现 30 nm 的共定位精度。这些测量能够以前所未有的精度定义与 NPC 的相互作用位点，并且将相互作用动力学与之前的体外测量进行比较，揭示了对易位机制的新见解。
All molecular traffic between nucleus and cytoplasm occurs via the nuclear pore complex (NPC) within the nuclear envelope. In this study we analyzed the interactions of the nuclear transport receptors kapα2, kapβ1, kapβ1ΔN44, and kapβ2, and the model transport substrate, BSA-NLS, with NPCs to determine binding sites and kinetics using single-molecule microscopy in living cells. Recombinant transport receptors and BSA-NLS were fluorescently labeled by AlexaFluor 488, and microinjected into the cytoplasm of living HeLa cells expressing POM121-GFP as a nuclear pore marker. After bleaching the dominant GFP fluorescence the interactions of the microinjected molecules could be studied using video microscopy with a time resolution of 5 ms, achieving a colocalization precision of 30 nm. These measurements allowed defining the interaction sites with the NPCs with an unprecedented precision, and the comparison of the interaction kinetics with previous in vitro measurements revealed new insights into the translocation mechanism.
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影响因子：
4.8
作者：
Naim, Bracha;Brumfeld, Vlad;Reich, Ziv
通讯作者：
Reich, Ziv
影响因子：
2.9
作者：
Chook, YM;Jung, A;Blobel, G
通讯作者：
Blobel, G
DOI：
10.1083/jcb.200411005
发表时间：
2005-01-17
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Kubitscheck U;Grünwald D;Hoekstra A;Rohleder D;Kues T;Siebrasse JP;Peters R
通讯作者：
Peters R
影响因子：
7.8
作者：
Lyman, SK;Guan, TL;Gerace, L
通讯作者：
Gerace, L
影响因子：
56.9
作者：
Frey, Steffen;Richter, Ralf P.;Goerlich, Dirk
通讯作者：
Goerlich, Dirk