The Tol2-mediated Gal4-UAS method for gene and enhancer trapping in zebrafish.
The Tol2-mediated Gal4-UAS method for gene and enhancer trapping in zebrafish.
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DOI：
10.1016/j.ymeth.2009.01.004
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发表时间：
2009-11
期刊：
影响因子：
4.8
通讯作者：
Kawakami, Koichi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Asakawa, Kazuhide;Kawakami, Koichi
Gal4-UAS系统为体内基因和细胞的功能分析提供了强有力的工具，在果蝇中得到了广泛的应用。这种方法的有效性依赖于P元件介导的Gal4增强子捕获，它可以有效地在特定细胞中产生表达Gal4的转基因蝇系。然而，由于缺乏有效的转基因方法，在脊椎动物系统中还没有开发出类似的方法。我们一直在利用马达卡鱼的Tol2元素开发转座子技术。利用其产生全基因组插入的能力，我们在斑马鱼中开发了Gal4基因陷阱和增强子陷阱方法，使我们能够在特定细胞中创建各种表达Gal4的转基因鱼。通过将转基因系与携带UAS（上游激活序列）下游多种报告基因和效应基因的转基因鱼系杂交，可以在体内观察和操纵表达gal4的细胞。因此，Gal4基因诱捕和增强子诱捕方法与UAS细胞系一起使斑马鱼基因和细胞的详细分析成为可能。在这里，我们描述了在斑马鱼中执行Gal4基因陷阱和增强子陷阱筛选的方案及其在脊椎动物神经回路研究中的应用。
The Gal4-UAS system provides powerful tools to analyze the function of genes and cells in vivo and has been extensively employed in Drosophila. The usefulness of this approach relies on the P element-mediated Gal4 enhancer trapping, which can efficiently generate transgenic fly lines expressing Gal4 in specific cells. Similar approaches, however, had not been developed in vertebrate systems due to the lack of an efficient transgenesis method. We have been developing transposon techniques by using the madaka fish Tol2 element. Taking advantage of its ability to generate genome-wide insertions, we developed the Gal4 gene trap and enhancer trap methods in zebrafish that enabled us to create various transgenic fish expressing Gal4 in specific cells. The Gal4-expressing cells can be visualized and manipulated in vivo by crossing the transgenic lines with transgenic fish lines carrying various reporter and effector genes downstream of UAS (upstream activating sequence). Thus, the Gal4 gene trap and enhancer trap methods together with UAS lines now make detailed analyses of genes and cells in zebrafish feasible. Here, we describe the protocols to perform Gal4 gene trap and enhancer trap screens in zebrafish and their application to the studies of vertebrate neural circuits.
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影响因子：
2.7
作者：
Davison, Jon M.;Akitake, Courtney M.;Parsons, Michael J.
通讯作者：
Parsons, Michael J.
影响因子：
14.9
作者：
Baron, U;Gossen, M;Bujard, H
通讯作者：
Bujard, H
影响因子：
64.8
作者：
FISCHER, JA;GINIGER, E;PTASHNE, M
通讯作者：
PTASHNE, M
DOI：
10.1073/pnas.97.21.11403
发表时间：
2000-10-10
影响因子：
11.1
作者：
Kawakami, K;Shima, A;Kawakami, N
通讯作者：
Kawakami, N
影响因子：
2.7
作者：
Emelyanov, Alexander;Parinov, Serguei
通讯作者：
Parinov, Serguei