The use of antisense mRNA to inhibit the tonoplast H+ ATPase in carrot.
The use of antisense mRNA to inhibit the tonoplast H+ ATPase in carrot.
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使用反义 mRNA 抑制胡萝卜中的液泡膜 H ATP 酶。
DOI：
--
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发表时间：
1992
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Lincoln Taiz
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
J. Gogarten;J. Fichmann;Y. Braun;Louis W. Morgan;P. Styles;S. L. Taiz;K. DeLapp;Lincoln Taiz
将胡萝卜液泡H ~+ ATPase A亚基cDNA的编码区和5'端非编码区以反义方向克隆到花椰菜花叶病毒35 S启动子后，转化胡萝卜根细胞。突变体细胞系的液泡膜组分中巴非霉素敏感的ATP酶、H（+）泵和14 C-O-甲基葡萄糖摄取活性被特异性抑制。蛋白质凝胶印迹证实，A亚基的表达被抑制在液泡膜部分，但不是在高尔基体部分。二维蛋白质凝胶印迹的野生型和控制pH 70细胞系的总微粒体揭示了两个主要的免疫反应性多肽在酸性pI范围。相反，高度纯化的液泡膜只含有酸性较低的多肽。由于酸性多肽优先减少在两个反义细胞系中，我们推断，反义结构特异性地阻断了胡萝卜中V-ATP酶A亚基的液泡膜特异性亚型的表达。含有反义构建体的再生植物表现出改变的叶形态和减少的细胞扩增。改变的表型与反义构建体的存在相关。
Carrot root cells were transformed with the coding or 5' noncoding regions of the carrot vacuolar H+ ATPase A subunit cDNA cloned in the antisense orientation behind the cauliflower mosaic virus 35S promoter. Bafilomycin-sensitive ATPase, H(+)-pumping, and 14C-O-methyl-glucose uptake activities were specifically inhibited in the tonoplast fractions of mutant cell lines. Protein gel blotting confirmed that the expression of the A subunit was inhibited in the tonoplast fraction, but not in the Golgi fraction. Two-dimensional protein gel blots of total microsomes of wild-type and control transformant cell lines revealed two major immunoreactive polypeptides in the acidic pI range. In contrast, highly purified tonoplast membranes contained only the less acidic polypeptide. Because the less acidic polypeptide was preferentially diminished in the two antisense cell lines, we infer that the antisense constructs specifically blocked expression of a tonoplast-specific isoform of the V-ATPase A subunit in carrot. Regenerated plants containing the antisense constructs exhibited altered leaf morphologies and reduced cell expansion. The altered phenotype was correlated with the presence of the antisense construct.
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DOI：
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发表时间：
1986
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作者：
Timchak,LM;Kruse,F;Marnell,MH;Draper,RK
通讯作者：
Draper,RK
DOI：
10.1073/pnas.86.17.6661
发表时间：
1989-09-01
影响因子：
11.1
作者：
GOGARTEN, JP;KIBAK, H;YOSHIDA, M
通讯作者：
YOSHIDA, M
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10.1073/pnas.89.8.3541
发表时间：
1992-04-15
影响因子：
11.1
作者：
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通讯作者：
GLUCK, S
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发表时间：
1988-02
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通讯作者：
D. Posnett;H. McGrath;J. Tam
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