Size-Controlled and Shelf-Stable DNA Particles for Production of Lentiviral Vectors.
Size-Controlled and Shelf-Stable DNA Particles for Production of Lentiviral Vectors.
复制标题
用于生产慢病毒载体的尺寸控制且货架稳定的 DNA 颗粒。
DOI：
10.1021/acs.nanolett.1c01421
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发表时间：
2021-07-14
期刊：
影响因子：
10.8
通讯作者：
Mao HQ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hu Y;Zhu Y;Sutherland ND;Wilson DR;Pang M;Liu E;Staub JR;Berlinicke CA;Zack DJ;Green JJ;Reddy SK;Mao HQ
由质粒 DNA (pDNA) 和聚氮丙啶 (PEI) 组装而成的聚电解质复合颗粒已被广泛用于生产用于基因治疗的慢病毒载体 (LVV)。目前 pDNA/PEI 颗粒的批量模式制备在大规模 LVV 制造过程中再现性有限，导致严格控制颗粒稳定性、转染结果和 LVV 产量方面面临挑战。在这里，我们确定 pDNA/PEI 颗粒的大小是高转染效率的关键决定因素，由于细胞摄取相关机制，最佳大小为 400-500 nm。我们开发了一种基于动力学的方法，使用预组装的纳米颗粒作为构建块来组装尺寸受控且耐储存的颗粒，并展示了至少 100 mL 规模的生产可扩展性。胶体稳定性和转染效率的保持以使用行业标准方案生成的颗粒为基准。这种颗粒制造方法有效简化了病毒制造流程，提高了生产质量和一致性。
Polyelectrolyte complex particles assembled from plasmid DNA (pDNA) and poly(ethylenimine) (PEI) have been widely used to produce lentiviral vectors (LVVs) for gene therapy. The current batch-mode preparation for pDNA/PEI particles presents limited reproducibility in large-scale LVV manufacturing processes, leading to challenges in tightly controlling particle stability, transfection outcomes, and LVV production yield. Here we identified the size of pDNA/PEI particles as a key determinant for a high transfection efficiency with an optimal size of 400–500 nm, due to a cellular-uptake-related mechanism. We developed a kinetics-based approach to assemble size-controlled and shelf-stable particles using preassembled nanoparticles as building blocks and demonstrated production scalability on a scale of at least 100 mL. The preservation of colloidal stability and transfection efficiency was benchmarked against particles generated using an industry standard protocol. This particle manufacturing method effectively streamlines the viral manufacturing process and improves the production quality and consistency.
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影响因子：
4.8
作者：
Dalby, B;Cates, S;Ciccarone, VC
通讯作者：
Ciccarone, VC
DOI：
10.1073/pnas.90.18.8392
发表时间：
1993-09-15
影响因子：
11.1
作者：
PEAR, WS;NOLAN, GP;BALTIMORE, D
通讯作者：
BALTIMORE, D
影响因子：
3.5
作者：
Kopatz, I;Remy, JS;Behr, JP
通讯作者：
Behr, JP
DOI：
10.1038/mtm.2016.17
发表时间：
2016
期刊：
Molecular therapy. Methods & clinical development
影响因子：
--
作者：
Merten OW;Hebben M;Bovolenta C
通讯作者：
Bovolenta C
影响因子：
5.1
作者：
Ogris, M;Steinlein, P;Wagner, E
通讯作者：
Wagner, E