Development and cross-reactive properties of monoclonal antibodies to bovine matrix vesicle alkaline phosphatase.
Development and cross-reactive properties of monoclonal antibodies to bovine matrix vesicle alkaline phosphatase.
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牛基质囊泡碱性磷酸酶单克隆抗体的开发和交叉反应特性。
DOI：
10.1016/8756-3282(86)90258-9
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发表时间：
1986
期刊：
影响因子：
4.1
通讯作者：
Anderson,HC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Oppliger,I;Vaananen,HK;Munoz,PA;Hsu,HH;Morris,DC;Anderson,HC
碱性磷酸酶（ALP）集中在基质囊泡的膜上，被认为在初始钙化中起作用。为了进一步纯化、表征和鉴定组织中的这种酶，开发了针对分离的胎牛基质囊泡中的ALP 4的单克隆抗体。使用标准杂交瘤技术，将源自用Sepharose 6 B纯化的胎牛基质囊泡ALcase 3免疫的小鼠的脾淋巴细胞与小鼠浆细胞瘤细胞（X63-Ag-8.653系）融合。使用新开发的双重免疫吸附试验筛选超免疫血清和杂交瘤培养上清液中是否存在特异性抗体，其中将推定抗体加入预涂有亲和纯化的兔抗小鼠免疫球蛋白的微量滴定板威尔斯孔中。孵育和洗涤后，向每个孔中加入部分纯化的胎牛基质囊泡ALP 4。该酶仅粘附于含有特异性抗丙氨酸氨基转移酶抗体的威尔斯孔。通过加入酶底物磷酸对硝基苯酯并在平板-阅读分光光度计中在405 nm处读取威尔斯，鉴定这些威尔斯孔。随后克隆了产生特异性抗体的杂交瘤，并在降植烷引发的小鼠中生长为产生腹水的肿瘤。Ouchterlony分析表明该细胞系分泌IgG 1类免疫球蛋白。该抗体与来自小牛基质囊泡的ALP 4特异性反应，与牛肾、肝、胎盘来源和人骨的ALP 4交叉反应，但不与牛肠ALP 4或来自从佝偻病大鼠生长板软骨分离的基质囊泡的ALP 4交叉反应。
Alkaline phosphatase (ALPase), concentrated in the membranes of matrix vesicles, is believed to play a role in initial calcification. To further purify, characterize, and identify this enzyme in tissue, a monoclonal antibody was developed against the ALPase of isolated fetal calf matrix vesicles. Splenic lymphocytes derived from mice immunized with Sepharose 6B-purified fetal calf matrix vesicle ALPase were fused with mouse plasmacytoma cells (line X63-Ag-8.653) using standard hybridoma technology. Hyperimmune sera and hybridoma culture supernatants were screened for the presence of specific antibody using a newly developed double-immunosorbent assay in which putative antibody is added to microtiter plate wells precoated with affinity-purified rabbit antimouse immunoglobulin. After incubation and washing, partially purified fetal calf matrix vesicle ALPase is added to each well. The enzyme adheres only to wells that contain specific antiALPase antibody. These wells are identified by adding the enzyme substrate p-nitrophenyl phosphate and reading the wells in a plate-reading spectrophotometer at 405 nm. A hybridoma-producing specific antibody was subsequently cloned and grown as ascities-producing tumors in pristane-primed mice. Ouchterlony analysis indicated that the cell line secretes an immunoglobulin of lgG1class. This antibody reacts specifically with ALPase derived from calf matrix vesicles and cross-reacts with ALPase of bovine kidney, liver, and placental origin and human bone but does not crossreact with bovine intestinal ALPase or ALPase derived from matrix vesicles isolated from rachitic rat growth plate cartilage.
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L. Evans
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