Temporally resolved interactions between antigen-stimulated IgE receptors and Lyn kinase on living cells.
Temporally resolved interactions between antigen-stimulated IgE receptors and Lyn kinase on living cells.
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DOI：
10.1083/jcb.200503110
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发表时间：
2005-11-07
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Webb WW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Larson DR;Gosse JA;Holowka DA;Baird BA;Webb WW
在通过抗原交联后，免疫球蛋白E（IgE）的高亲和力受体Fc ε RI被Src家族酪氨酸激酶林恩磷酸化以启动肥大细胞信号传导，导致脱粒。使用荧光相关光谱法（FCS），我们观察到单个细胞上荧光标记的IgE-Fc荧光素酶抑制剂和Lyn-EGFP之间的刺激依赖性关联。我们还同时测量这些蛋白质的横向扩散的时间变化。这些蛋白质之间的抗原刺激的相互作用检测后的受体磷酸化的启动表现出时间依赖性的变化，表明Fc β RI和Lyn-EGFP之间的多重关联。在此期间，我们还观察到持续减少Lyn-EGFP的横向扩散，这是依赖于Src家族激酶活性。这些刺激的相互作用之间没有观察到Fc γ RI和嵌合的EGFP，其中只含有来自林恩的膜靶向序列。我们的研究结果揭示了实时之间的相互作用林恩和交联的Fc β RI牵连下游信号事件。他们证明了FCS互相关分析的能力，以调查在完整的活细胞中信号依赖的蛋白质-蛋白质相互作用的机制。
Upon cross-linking by antigen, the high affinity receptor for immunoglobulin E (IgE), FcɛRI, is phosphorylated by the Src family tyrosine kinase Lyn to initiate mast cell signaling, leading to degranulation. Using fluorescence correlation spectroscopy (FCS), we observe stimulation-dependent associations between fluorescently labeled IgE-FcɛRI and Lyn-EGFP on individual cells. We also simultaneously measure temporal variations in the lateral diffusion of these proteins. Antigen-stimulated interactions between these proteins detected subsequent to the initiation of receptor phosphorylation exhibit time-dependent changes, suggesting multiple associations between FcɛRI and Lyn-EGFP. During this period, we also observe a persistent decrease in Lyn-EGFP lateral diffusion that is dependent on Src family kinase activity. These stimulated interactions are not observed between FcɛRI and a chimeric EGFP that contains only the membrane-targeting sequence from Lyn. Our results reveal real-time interactions between Lyn and cross-linked FcɛRI implicated in downstream signaling events. They demonstrate the capacity of FCS cross-correlation analysis to investigate the mechanism of signaling-dependent protein–protein interactions in intact, living cells.
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影响因子：
5.4
作者：
Amoui, M;Draber, P;Draberova, L
通讯作者：
Draberova, L
DOI：
10.1073/pnas.180317197
发表时间：
2000-09-12
影响因子：
11.1
作者：
Heinze, KG;Koltermann, A;Schwille, P
通讯作者：
Schwille, P
DOI：
10.1083/jcb.200303200
发表时间：
2003-09-29
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Larson DR;Ma YM;Vogt VM;Webb WW
通讯作者：
Webb WW
影响因子：
5.3
作者：
Honda, ZI;Suzuki, T;Yamamoto, K
通讯作者：
Yamamoto, K
影响因子：
4.8
作者：
Denny, MF;Kaufman, HC;Straus, DB
通讯作者：
Straus, DB