One-step generation of mice carrying reporter and conditional alleles by CRISPR/Cas-mediated genome engineering.
One-step generation of mice carrying reporter and conditional alleles by CRISPR/Cas-mediated genome engineering.
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DOI：
10.1016/j.cell.2013.08.022
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发表时间：
2013-09-12
期刊：
影响因子：
64.5
通讯作者：
Jaenisch R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yang H;Wang H;Shivalila CS;Cheng AW;Shi L;Jaenisch R
II型细菌CRISPR/Cas系统是一种新型基因组工程技术，易于多重基因靶向。在这里，我们通过共注射受精卵与Cas9 mRNA、不同的指导RNA（sgRNA）以及不同大小的DNA载体来创建报告基因和条件突变小鼠。使用这种一步程序，我们产生了在Nanog、Sox 2和Oct 4基因中携带标签或荧光报告基因构建体的小鼠以及Mecp 2条件突变小鼠。此外，使用靶向Mecp 2基因中两个独立位点的sgRNA，我们产生了携带约700 bp的预测缺失的小鼠。最后，我们分析了基因修饰小鼠和ESC系中五种sgRNA的潜在脱靶，并仅在极少数情况下鉴定了脱靶突变。
The type II bacterial CRISPR/Cas system is a novel genome engineering technology with the ease of multiplexed gene targeting. Here we created reporter and conditional mutant mice by co-injection of zygotes with Cas9 mRNA, different guide RNAs (sgRNAs) as well as DNA vectors of different sizes. Using this one step procedure we generated mice carrying a tag or a fluorescent reporter construct in the Nanog, the Sox2 and the Oct4 gene as well as Mecp2 conditional mutant mice. In addition, using sgRNAs targeting two separate sites in the Mecp2 gene, we produced mice harboring the predicted deletions of about 700 bps. Finally, we analyzed potential off-targets of five sgRNAs in gene-modified mice and ESC lines and identified off-target mutations in only rare instances.
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通讯作者：
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DOI：
10.1073/pnas.1009424107
发表时间：
2010-08-24
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作者：
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影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
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