Observing Single-Molecule Dynamics at Millimolar Concentrations.
Observing Single-Molecule Dynamics at Millimolar Concentrations.
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DOI：
10.1002/anie.201612050
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发表时间：
2017-02-20
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Goldsmith RH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Goldschen-Ohm MP;White DS;Klenchin VA;Chanda B;Goldsmith RH
单分子荧光显微镜是揭示化学动力学和分子缔合机制的有力工具，但仅限于低浓度的荧光物种，仅适用于研究高亲和力反应。在这里，我们结合联合收割机纳米光子零模波导（ZMW）与荧光共振能量转移（FRET），以解决单分子缔合动力学在高达毫摩尔浓度的荧光物种。这种方法将分子动力学的分辨率扩展到>100倍更高的浓度，使得能够在与生物和化学过程相关的浓度下进行观察，从而使单分子技术适用于大量以前无法达到的分子目标。我们部署这种方法显示结合cGMP起搏离子通道被削弱了较慢的内部构象变化。使用零模式波导和FRET，在毫摩尔浓度的荧光配体（比以前可获得的浓度高100倍）下的缔合动力学的单分子分辨率。
Single-molecule fluorescence microscopy is a powerful tool for revealing chemical dynamics and molecular association mechanisms, but was limited to low concentrations of fluorescent species only suitable for studying high affinity reactions. Here, we combine nanophotonic zero-mode waveguides (ZMW) with fluorescence resonance energy transfer (FRET) to resolve single-molecule association dynamics at up to millimolar concentrations of fluorescent species. This approach extends resolution of molecular dynamics to >100-fold higher concentrations, enabling observations at concentrations relevant to biological and chemical processes, and thus making single-molecule techniques applicable to a tremendous range of previously inaccessible molecular targets. We deploy this approach to show binding of cGMP to pacemaking ion channels is weakened by a slower internal conformational change. Single-molecule resolution of association dynamics at millimolar concentrations of fluorescent ligands (>100-fold higher concentrations than previously accessible) with Zero-mode waveguides and FRET.
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影响因子：
64.8
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1073/pnas.0710982105
发表时间：
2008-01-29
影响因子：
11.1
作者：
Korlach, Jonas;Marks, Patrick J.;Turner, Stephen W.
通讯作者：
Turner, Stephen W.
影响因子：
46.2
作者：
Zheng Q;Juette MF;Jockusch S;Wasserman MR;Zhou Z;Altman RB;Blanchard SC
通讯作者：
Blanchard SC
影响因子：
35
作者：
Kinkhabwala, Anika;Yu, Zongfu;Moerner, W. E.
通讯作者：
Moerner, W. E.
影响因子：
15
作者：
Ng, James D.;Upadhyay, Sunil P.;Goldsmith, Randall H.
通讯作者：
Goldsmith, Randall H.