Physical and Functional Analysis of the Putative Rpn13 Inhibitor RA190.
Physical and Functional Analysis of the Putative Rpn13 Inhibitor RA190.
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假定RPN13抑制剂RA190的物理和功能分析。
DOI：
10.1016/j.chembiol.2020.08.007
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发表时间：
2020-11-19
影响因子：
8.6
通讯作者：
Kodadek T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dickson P;Abegg D;Vinogradova E;Takaya J;An H;Simanski S;Cravatt BF;Adibekian A;Kodadek T
Rpn13是26S蛋白酶体中的泛素受体之一。Rpn13的Cys88被认为是RA190的主要靶点，RA190是一种具有有趣的抗癌活性的亲电小分子。在这里，我们检查了RA190通过与Rpn13接触而介导其细胞毒作用的说法。我们没有发现任何证据表明情况就是这样。在体外，RA190对Rpn13的任何已知相互作用都没有可测量的影响。在纤维素酶中，无论是在C88上还是在任何其他残基上，我们都没有看到RA190与Rpn13的物理结合。然而，在两个不同的细胞系中进行的化学蛋白质组学实验表明，RA190与数十种其他蛋白质密切相关。最后，增加或降低HeLa和黑色素瘤细胞中Rpn13的水平对HeLa或黑色素瘤细胞对RA190的敏感性没有影响。我们得出结论，Rpn13不是RA190的生理相关靶点。Dickson等人。对细胞毒性分子RA190进行全蛋白质组和靶向分析。尽管先前报道了RA190‘S对蛋白酶体泛素受体Rpn13的选择性，但该小组没有发现细胞参与的证据。相反，发现许多蛋白质被RA190连接，这表明它的抗癌活性是由多种药物驱动的。
Rpn13 is one of several ubiquitin receptors in the 26S proteasome. Cys88 of Rpn13 has been proposed to be the principal target of RA190, an electrophilic small molecule with interesting anti-cancer activities. Here, we examine the claim that RA190 mediates its cytotoxic effects through engagement with Rpn13. We find no evidence that this is the case. In vitro, RA190 is has no measurable effect on any of the known interactions of Rpn13. In cellulo, we see no physical engagement of Rpn13 by RA190, either on C88 or any other residue. However, chemical proteomics experiments in two different cell lines reveal that dozens of other proteins are heavily engaged by RA190. Finally, increasing or reducing the level of Rpn13 in HeLa and melanoma cells had no effect on the sensitivity of HeLa or melanoma cells to RA190. We conclude that Rpn13 is not the physiologically relevant target of RA190. Dickson et al. used proteome-wide and targeted analysis of a cytotoxic molecule, RA190. Despite previous reports of RA190’s selectivity for proteasomal ubiquitin receptor Rpn13, the group finds no evidence for cellular engagement. Instead, a number of proteins were found to be liganded by RA190, suggesting that polypharmacology drives its anti-cancer activity.
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