Brassica oleracea and B. napus.
Brassica oleracea and B. napus.
复制标题
甘蓝和甘蓝型油菜。
DOI：
10.1007/978-1-4939-1695-5_23
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Sparrow PA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sparrow PA
随着拟南芥和芸苔属植物遗传学和基因组学研究的不断深入，转基因技术已被广泛应用于阐明基因功能和培育新型作物。当研究人员的理想目标只是简单地修改或引入候选基因到芸苔属植物中时，易于遵循的方案和易于转化的基因型知识的可用性就成为一种有价值的资源。在本章中，我们概述了一个基本的A。tumefaciens介导的转化方法，使用4天龄的子叶外植体，已成功地应用于一系列不同的B. oleracea和B. napusgenotypes.为了演示的目的，我们主要集中在二倍体物种B。利用模式加倍单倍体基因型AG DH 1012对甘蓝型油菜进行了遗传分析。在卡那霉素选择仅3-4周后，可以分离第一个转基因芽。转化效率通常在15- 25%的范围内（基于来自100个接种外植体的15-25个PCR阳性独立芽）。大多数外植体会产生多个芽（每个外植体1-3+），因此每100个外植体实验产生的转基因芽总数将超过15-25个。该协议也适用于B.相应地突出了针对该物种的油菜和修饰。对于希望使用自己的植物基因型的研究人员，组织培养表型，有利于有效的转化也强调本章。
With the accelerating advances in genetics and genomics research inArabidopsisandBrassica, transformation technologies are now routinely being exploited to elucidate gene function as well as contributing to the development of novel enhanced crops. When a researcher’s desired goal is simply to modify or introduce candidate genes into a Brassica, the availability of easy-to-follow protocols and knowledge of readily transformable genotypes becomes a valuable resource. In this chapter we outline a basicA. tumefaciens-mediatedtransformation method, using 4-day-old cotyledonary explants, that has been successfully applied to a range of differentB. oleraceaandB. napusgenotypes. For demonstration purposes, we focus primarily on the diploid speciesB. oleraceausing a model doubled haploid genotype, AG DH1012. After only 3–4 weeks on kanamycin selection the first transgenic shoots can be isolated. Transformation efficiencies are typically in the region of 15–25 % (based on 15–25 PCR-positiveindependentshoots from 100 inoculated explants). Most explants will produce multiple shoots (1–3+ per explant) and so the total number of transgenic shoots produced will exceed 15–25 per 100 explant experiment. The protocol is also applicable toB. napusand modifications specific to this species are highlighted accordingly. For researchers wishing to use their own plant genotype, tissue culture phenotypes that are conducive to efficient transformation are also highlighted within this chapter.
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