Identification of phosphorylation sites within the signaling adaptor APPL1 by mass spectrometry.
Identification of phosphorylation sites within the signaling adaptor APPL1 by mass spectrometry.
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DOI：
10.1021/pr901043e
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发表时间：
2010-03-05
影响因子：
4.4
通讯作者：
McLean, John A.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gant-Branum, Randi L.;Broussard, Joshua A.;Mahsut, Ablatt;Webb, Donna J.;McLean, John A.
关键词：
APPL1是一种膜相关接头蛋白，参与多种细胞过程，包括细胞凋亡、增殖和存活。虽然人们对APPL1的生物学作用以及蛋白质和膜的相互作用越来越感兴趣，但还没有产生一个全面的磷酸化图谱。在这项研究中，我们使用质谱仪(MS)来鉴定APPL1中的13个磷酸化残基。通过使用多种酶(胰酶、糜蛋白酶和Glu C)，以及线性离子陷阱(LTQ)MS和LTQ-Orbitrap-MS的重复实验，获得了99.6%的联合序列覆盖率。已鉴定的四个位点位于重要的功能结构域，提示可能在调节APPL1中发挥作用。其中一个位于BAR结构域内，两个靠近PH结构域边缘的簇，一个位于PTB结构域内。这些磷酸化位点可能通过调节APPL1结构域与其他蛋白质和膜相互作用的能力来控制APPL1的功能。
APPL1 is a membrane-associated adaptor protein implicated in various cellular processes, including apoptosis, proliferation, and survival. Although there is increasing interest in the biological roles as well as the protein and membrane interactions of APPL1, a comprehensive phosphorylation profile has not been generated. In this study, we use mass spectrometry (MS) to identify 13 phosphorylated residues within APPL1. By using multiple proteases (trypsin, chymotrypsin, and Glu C) and replicate experiments of linear ion trap (LTQ) MS and LTQ-Orbitrap-MS, a combined sequence coverage of 99.6% is achieved. Four of the identified sites are located in important functional domains, suggesting a potential role in regulating APPL1. One of these sites is within the BAR domain, two cluster near the edge of the PH domain, and one is located within the PTB domain. These phosphorylation sites may control APPL1 function by regulating the ability of APPL1 domains to interact with other proteins and membranes.
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