Laser-free Hydroxyl Radical Protein Footprinting to Perform Higher Order Structural Analysis of Proteins.
Laser-free Hydroxyl Radical Protein Footprinting to Perform Higher Order Structural Analysis of Proteins.
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DOI：
10.3791/61861
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发表时间：
2021-06-04
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Misra SK
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Weinberger SR;Chea EE;Sharp JS;Misra SK
羟基自由基蛋白足迹（HRPF）是一种新兴的、有前途的高阶结构分析技术，可提供蛋白质结构变化、蛋白质-蛋白质相互作用或蛋白质-配体相互作用的信息。HRPF利用羟基自由基（▪OH）不可逆地标记蛋白质的溶剂可及表面。执行HRPF的固有复杂性、成本和危险性极大地限制了其在生物制药领域的广泛采用。这些因素包括：1)使用复杂、危险和昂贵的激光器，需要大量的安全预防措施；2)背景清除▪OH导致的HRPF的不可重复性限制了比较研究。本出版物提供了一个无激光HRPF系统的操作协议。这种无激光HRPF系统利用高能、高压等离子体光源闪光氧化技术与在线自由基剂量测定。等离子体光源比基于激光的HRPF系统更安全，更容易使用，更有效地产生羟基自由基，并且在线自由基剂量计增加了研究的可重复性。结合起来，无激光HRPF系统解决并克服了上述基于激光技术的缺点和局限性。
Hydroxyl Radical Protein Footprinting (HRPF) is an emerging and promising higher order structural analysis technique that provides information on changes in protein structure, protein-protein interactions, or protein-ligand interactions. HRPF utilizes hydroxyl radicals (▪OH) to irreversibly label a protein’s solvent accessible surface. The inherent complexity, cost, and hazardous nature of performing HRPF have substantially limited broad-based adoption in biopharma. These factors include: 1) the use of complicated, dangerous, and expensive lasers that demand substantial safety precautions; and 2) the irreproducibility of HRPF caused by background scavenging of ▪OH that limit comparative studies. This publication provides a protocol for operation of a laser-free HRPF system. This laser-free HRPF system utilizes a high energy, high-pressure plasma light source flash oxidation technology with in-line radical dosimetry. The plasma light source is safer, easier to use, and more efficient in generating hydroxyl radicals than laser-based HRPF systems, and the in-line radical dosimeter increases the reproducibility of studies. Combined, the laser-free HRPF system addresses and surmounts the mentioned shortcomings and limitations of laser-based techniques.
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影响因子：
62.1
作者：
Liu XR;Zhang MM;Gross ML
通讯作者：
Gross ML
DOI：
10.1007/s13361-013-0582-4
发表时间：
2013-06
影响因子：
3.2
作者：
Jones, Lisa M.;Zhang, Hao;Cui, Weidong;Kumar, Sandeep;Sperry, Justin B.;Carroll, James A.;Gross, Michael L.
通讯作者：
Gross, Michael L.
影响因子：
120.7
作者：
Giezen, Thijs J.;Mantel-Teeuwisse, Aukje K.;Egberts, Antoine C. G.
通讯作者：
Egberts, Antoine C. G.
影响因子：
7.4
作者：
Aye, TT;Low, TY;Sze, SK
通讯作者：
Sze, SK
影响因子：
7.4
作者：
Lu, Yue;Zhang, Hao;Niedzwiedzki, Dariusz M.;Jiang, Jing;Blankenship, Robert E.;Gross, Michael L.
通讯作者：
Gross, Michael L.