Characterization of HIV Tat modifications using novel methyl-lysine-specific antibodies.
Characterization of HIV Tat modifications using novel methyl-lysine-specific antibodies.
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DOI：
10.1016/j.ymeth.2010.07.001
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发表时间：
2011-01
期刊：
影响因子：
4.8
通讯作者：
Ott, Melanie
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pagans, Sara;Sakane, Naoki;Schnoelzer, Martina;Ott, Melanie
修饰特异性抗体是检查细胞中翻译后蛋白质修饰的动力学和功能的重要工具。在这里，我们详细描述了 HIV 反式激活因子 Tat 中单甲基化、二甲基化和三甲基化赖氨酸 51 特异性多克隆抗体的生成。赖氨酸 51 是一个高度保守的残基，位于 Tat 的 RNA 结合区，也是赖氨酸甲基转移酶 KMT1E (SETDB1) 和 KMT7 (Set7/9) 的靶标。使用亲和纯化的 Tat 甲基特异性抗体，我们发现细胞 Tat 主要在赖氨酸 51 处单甲基化，这是通过 KMT7 共表达增强的修饰。
Modification-specific antibodies are important tools to examine the dynamics and functions of posttranslational protein modifications in cells. Here, we describe in detail the generation of polyclonal antibodies specific for mono-, di- and trimethylated lysine 51 within the HIV transactivator Tat. Lysine 51 is a highly conserved residue located in the RNA-binding region of Tat and the target of lysine methyltransferases KMT1E (SETDB1) and KMT7 (Set7/9). Using affinity-purified methyl-specific antibodies of Tat, we find that cellular Tat is predominantly monomethylated at lysine 51, a modification enhanced by coexpression of KMT7.
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