Silencing of Cav1.2 gene in neonatal cardiomyocytes by lentiviral delivered shRNA.
Silencing of Cav1.2 gene in neonatal cardiomyocytes by lentiviral delivered shRNA.
复制标题
DOI：
10.1016/j.bbrc.2009.04.150
复制
发表时间：
2009-07-10
影响因子：
3.1
通讯作者：
Boutjdir, Mohamed
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Karnabi, Eddy;Qu, Yongxia;Mancarella, Salvatore;Yue, Yuankun;Wadgaonkar, Raj;Boutjdir, Mohamed
Cav1.2 （α1C）和Cav1.3 (α1D) l型Ca通道在心脏中共表达。迄今为止，还没有药理或生物物理工具来分离心肌细胞中的α1D和α1C钙电流（ICa-L）。在此，我们建立了一个生理模型，利用RNA干扰来研究α1D ICa-L在天然肌细胞中的作用。用α1C特异性siRNA转染大鼠新生心肌细胞（RNC），在mRNA和蛋白水平上的沉默效率较低（50-60%）。采用慢病毒shRNA进行实时PCR和Western blot检测，α1C基因的转染效率为100%，沉默率为92%。电生理实验表明，在慢病毒转染的细胞中，总ICa-L同样减少了80%。生化和功能数据显示，使用慢病毒shRNA在心肌细胞中具有较高的转染和沉默效率。这种新方法可以评估α1C和α1D Ca通道在天然肌细胞中的作用，并可用于检查它们在生理和病理环境中的作用。
Cav1.2 (α1C) and Cav1.3 (α1D) L-type Ca channels are co-expressed in the heart. To date, there are no pharmacological or biophysical tools to separate α1D from α1C Ca currents (ICa-L) in cardiomyocytes. Here, we established a physiological model to study α1D ICa-L in native myocytes using RNA interference. Transfection of rat neonatal cardiomyocytes (RNC) with α1C specific siRNA resulted in low silencing efficiency (50–60%) at the mRNA and protein levels. The use of lentivirus shRNA resulted in 100% transfection efficiency and 92% silencing of the α1C gene by real-time PCR and Western blot. Electrophysiological experiments showed that the total ICa-L was similarly reduced by 80% in lentivirus transfected cells. Both biochemical and functional data demonstrated high transfection and silencing efficiency in the cardiomyocytes using lentiviral shRNA. This novel approach allows for the assessments of the roles of α1C and α1D Ca channels in native myocytes and could be used to examine their roles in physiological and pathological settings.
登录
查看更多内容
影响因子：
64.8
作者：
Mello, CC;Conte, D
通讯作者：
Conte, D
影响因子：
37.8
作者：
Qu, YX;Baroudi, G;Boutjdir, M
通讯作者：
Boutjdir, M
DOI：
10.1016/j.bbrc.2007.01.101
发表时间：
2007-03-30
影响因子：
3.1
作者：
Qu, Yongxia;Karnabi, Eddy;Boutjdir, Mohamed
通讯作者：
Boutjdir, Mohamed
影响因子：
8.8
作者：
Mikami, M;Yang, J
通讯作者：
Yang, J
影响因子：
4.8
作者：
Seisenberger, C;Specht, V;Hofmann, F
通讯作者：
Hofmann, F