Expression, purification and biochemical characterization of Schizosaccharomyces pombe Mcm4, 6 and 7.
Expression, purification and biochemical characterization of Schizosaccharomyces pombe Mcm4, 6 and 7.
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DOI：
10.1186/1471-2091-14-5
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发表时间：
2013-02-27
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Chen XS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Xu M;Chang YP;Chen XS
真核生物微小染色体维持蛋白（MCM）的异源六聚体在基因组DNA复制中起着重要作用。环状Mcm 2 -7六聚体包含每个亚基中的一个，在体外显示解旋酶活性，并在DNA上形成双六聚体。Mcm 4/6/7在体外也形成具有解旋酶活性的六聚体复合物。我们使用了一个土方大肠杆菌表达系统来表达裂殖酵母Mcm 4，6和7的各种结构域，以表征其结构域结构，寡聚状态，和可能的内部/内部亚基相互作用。我们还成功地利用共表达系统在大肠杆菌中同时表达了Mcm 4/6/7，并以高产量和高纯度纯化了功能性Mcm 4/6/7复合物，为将来的结构和生物化学研究提供了大量蛋白的手段。根据我们的研究结果和其他人的，模型提出了亚基的安排和结构的Mcm 4/6/7六聚体和Mcm 2 -7双六聚体。
The hetero-hexamer of the eukaryotic minichromosome maintenance (MCM) proteins plays an essential role in replication of genomic DNA. The ring-shaped Mcm2-7 hexamers comprising one of each subunit show helicase activity in vitro, and form double-hexamers on DNA. The Mcm4/6/7 also forms a hexameric complex with helicase activity in vitro. We used an Escherichiai coli expression system to express various domains of Schizosaccharomyces pombe Mcm4, 6 and 7 in order to characterize their domain structure, oligomeric states, and possible inter-/intra-subunit interactions. We also successfully employed a co-expression system to express Mcm4/6/7 at the same time in Escherichiai coli, and have purified functional Mcm4/6/7 complex in a hexameric state in high yield and purity, providing a means for generating large quantity of proteins for future structural and biochemical studies. Based on our results and those of others, models were proposed for the subunit arrangement and architecture of both the Mcm4/6/7 hexamer and the Mcm2-7 double-hexamer.
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影响因子：
14.9
作者：
Liu W;Pucci B;Rossi M;Pisani FM;Ladenstein R
通讯作者：
Ladenstein R
影响因子：
4.8
作者：
Lee, JK;Hurwitz, J
通讯作者：
Hurwitz, J
DOI：
10.1073/pnas.0911500106
发表时间：
2009-12-01
影响因子：
11.1
作者：
Evrin, Cecile;Clarke, Pippa;Speck, Christian
通讯作者：
Speck, Christian
DOI：
10.1073/pnas.030539597
发表时间：
2000-02-15
影响因子：
11.1
作者：
Chong, JPJ;Hayashi, MK;Stillman, B
通讯作者：
Stillman, B
影响因子：
64.8
作者：
HALL, MN;GABAY, J;SCHWARTZ, M
通讯作者：
SCHWARTZ, M