Real-time functional imaging for monitoring miR-133 during myogenic differentiation.
Real-time functional imaging for monitoring miR-133 during myogenic differentiation.
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DOI：
10.1016/j.biocel.2009.04.018
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发表时间：
2009-11
影响因子：
4
通讯作者：
Asahara, Hiroshi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kato, Yoshio;Miyaki, Shigeru;Yokoyama, Shigetoshi;Omori, Shin;Inoue, Atsushi;Horiuchi, Machiko;Asahara, Hiroshi
MicroRNA (miRNA) 是一类非编码小 RNA，通过与目标 mRNA 的 3' 非翻译区 (UTR) 进行序列特异性相互作用，充当基因表达的负调节因子，并发挥各种生物学作用。 miR-133 被鉴定为肌肉特异性 miRNA，可在肌原分化过程中增强成肌细胞的增殖，尽管其在肌发生中的活性尚未完全表征。在这里，我们开发了一种新型逆转录病毒载体系统，通过使用通过 UTR 连接到 miR-133 靶序列的绿色荧光蛋白 (GFP) 和用于标准化的红色荧光蛋白来监测活细胞中的肌肉特异性 miRNA。我们证明，通过携带 miR-133 靶序列的 GFP 的减少，可以观察到 miR-133 在肌生成过程中的功能促进，这表明 miR-133 在肌生成过程中根据其表达特异性下调其靶标。我们基于细胞的 miRNA 功能测定监测 miR-133 活性应该是阐明 miRNA 在各种生物事件中的作用的有用工具。
MicroRNAs (miRNAs) are a class of non-coding small RNAs that act as negative regulators of gene expression through sequence-specific interactions with the 3′ untranslated regions (UTRs) of target mRNA and play various biological roles. miR-133 was identified as a muscle-specific miRNA that enhanced the proliferation of myoblasts during myogenic differentiation, although its activity in myogenesis has not been fully characterized. Here, we developed a novel retroviral vector system for monitoring muscle-specific miRNA in living cells by using a green fluorescent protein (GFP) that is connected to the target sequence of miR-133 via the UTR and a red fluorescent protein for normalization. We demonstrated that the functional promotion of miR-133 during myogenesis is visualized by the reduction of GFP carrying the miR-133 target sequence, suggesting that miR-133 specifically down-regulates its targets during myogenesis in accordance with its expression. Our cell-based miRNA functional assay monitoring miR-133 activity should be a useful tool in elucidating the role of miRNAs in various biological events.
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DOI：
10.1073/pnas.0602831103
发表时间：
2006-06-06
影响因子：
11.1
作者：
Rao, Prakash K.;Kumar, Roshan M.;Lodish, Harvey F.
通讯作者：
Lodish, Harvey F.
影响因子：
56.9
作者：
Lagos-Quintana, M;Rauhut, R;Tuschl, T
通讯作者：
Tuschl, T
DOI：
10.1083/jcb.200603008
发表时间：
2006-08-28
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Kim HK;Lee YS;Sivaprasad U;Malhotra A;Dutta A
通讯作者：
Dutta A
影响因子：
5.3
作者：
Cherry, SR;Biniszkiewicz, D;Jaenisch, R
通讯作者：
Jaenisch, R
影响因子：
64.8
作者：
O'Donnell, KA;Wentzel, EA;Mendell, JT
通讯作者：
Mendell, JT