Over-expression of secreted proteins from mammalian cell lines.
Over-expression of secreted proteins from mammalian cell lines.
复制标题
来自哺乳动物细胞系的分泌蛋白的过表达。
DOI：
10.1002/pro.2439
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发表时间：
2014-05
期刊：
影响因子：
8
通讯作者：
Barton, William A.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dalton, Annamarie C.;Barton, William A.
分泌型哺乳动物蛋白质需要开发强大的蛋白质过表达系统，以便对蛋白质功能进行晶体学和生物物理学研究。由于复杂的二硫键和独特的糖基化模式阻碍了在原核表达宿主中的折叠和表达，许多分泌型蛋白质需要在更复杂的真核表达系统中生产。在此，我们详细阐述了从瞬时或稳定转染的哺乳动物细胞系中获得高产率纯化分泌型蛋白质的方法。所讨论的问题包括合适表达载体的选择、蛋白质分泌信号序列的选择、用于增强蛋白质稳定性和纯化的融合标签的可用性、细胞系的选择以及各种形式下细胞的大规模培养。
Secreted mammalian proteins require the development of robust protein over-expression systems for crystallographic and biophysical studies of protein function. Due to complex disulfide bonds and distinct glycosylation patterns preventing folding and expression in prokaryotic expression hosts, many secreted proteins necessitate production in more complex eukaryotic expression systems. Here, we elaborate on the methods used to obtain high yields of purified secreted proteins from transiently or stably transfected mammalian cell lines. Among the issues discussed are the selection of appropriate expression vectors, choice of signal sequences for protein secretion, availability of fusion tags for enhancing protein stability and purification, choice of cell line, and the large-scale growth of cells in a variety of formats.
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影响因子：
7.3
作者：
Frenzel A;Hust M;Schirrmann T
通讯作者：
Schirrmann T
影响因子：
3.8
作者：
Chusainow, Janet;Yang, Yuan Sheng;Yap, Miranda G. S.
通讯作者：
Yap, Miranda G. S.
DOI：
10.1073/pnas.79.21.6522
发表时间：
1982-01-01
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA-BIOLOGICAL SCIENCES
影响因子：
--
作者：
GASSER, CS;SIMONSEN, CC;SCHIMKE, RT
通讯作者：
SCHIMKE, RT
影响因子：
3.8
作者：
Backliwal, Gaurav;Hildinger, Markus;Wurm, Florian M.
通讯作者：
Wurm, Florian M.
影响因子：
14.9
作者：
Bouabe H;Fässler R;Heesemann J
通讯作者：
Heesemann J