Improvement of reporter activity by IRES-mediated polycistronic reporter system.
Improvement of reporter activity by IRES-mediated polycistronic reporter system.
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DOI：
10.1093/nar/gkm1119
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发表时间：
2008-03
影响因子：
14.9
通讯作者：
Heesemann J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bouabe H;Fässler R;Heesemann J
许多体外和体内转基因应用需要异源基因的共表达。在双顺反子表达载体中使用内部核糖体进入位点 (IRES) 能够在靶细胞或整个生物体中表达由一个启动子控制的两个基因。在这里，我们描述了 IRES 开发的扩展，以生成能够表达多个报告基因的多顺反子载体，特别是提高自发荧光报告基因产物（例如绿色荧光蛋白（GFP））的荧光产量。我们发现 GFP 荧光输出的增加与多顺反子载体中 IRES-GFP 重复的数量成正比。通过使用串联 IRES 元件，可以从多胞体载体表达至少四个基因，而帽依赖性翻译基因的表达水平没有显着改变。此外，多个IRES元件控制下的基因表达对3'非翻译区（3'UTR）的转录后调控没有影响。因此，内源基因表达和调控，特别是那些由弱启动子控制的基因表达和调控，可以用我们的IRES依赖性多顺反子报告基因表达系统进行分析。
Many in vitro and in vivo applications for transgenesis require co-expression of heterologous genes. The use of internal ribosome entry sites (IRESs) in dicistronic expression vectors enables the expression of two genes controlled by one promoter in target cells or whole organisms. Here we describe the expansion of IRES exploitation to generate multicistronic vectors capable of expressing multiple reporter genes, especially to improve the fluorescence yield of autofluorescent reporter gene products such as green fluorescent protein (GFP). We found that the increase in fluorescence output of GFP is proportional to the number of IRES-GFP repeats in the multicistronic vector. At least four genes can be expressed from a multicistonic vector by using tandem IRES elements, with no significant alteration of the expression level of the cap-dependent translated gene. Moreover, gene expression under the control of multiple IRES element has no effect on the posttranscriptional regulation through 3′-untranslated regions (3′UTR). Thus, endogenous gene expression and regulation, especially those controlled by weak promoters, can be analyzed with our IRES-dependent polycistronic reporter gene expression system.
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