Diphtheria Toxin Translocation across Endosome Membranes
Diphtheria Toxin Translocation across Endosome Membranes
复制标题
白喉毒素跨内体膜易位
DOI：
10.1074/jbc.273.14.8351
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发表时间：
1998
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
E. Mekada
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
T. Umata;E. Mekada
通过使用过表达白喉毒素受体的细胞和一种用细菌成孔毒素渗透质膜的新方法，观察到片段a特异性易位到细胞质中，而全尺寸的DT和其他较小种类的DT衍生片段则留在细胞内囊泡中。具有跨膜结构域突变的DT蛋白的易位能力与其细胞毒性是一致的。电荷反转突变体E349K和D352K不将它们的片段A转移到细胞质中，而D352N则部分转移到细胞质中。转运不需要片段A的adp -核糖基转移酶活性。在内吞囊泡中检测到新的DT片段，其表观分子质量为28和35 kDa。28-kDa片段由片段A和片段B的n端片段组成，而35-kDa片段包含片段B的一部分，并且可能与28-kDa片段互补。时间过程研究表明，28-kDa片段在A片段易位到细胞质之前出现在胞内囊泡中，这提高了28-kDa片段是易位中间产物的可能性。我们提出了一个片段a易位的模型，该模型结合了使用新型渗透方法所做的观察。
By using cells overexpressing diphtheria toxin (DT) receptor and a novel method of permeabilizing the plasma membrane with a bacterial pore-forming toxin, specific translocation of fragment A to the cytosol was observed, whereas full-size DT and other minor species of DT-derived fragments were left in intracellular vesicles. The translocation competence of DT proteins with mutations in the transmembrane domain is consistent with their cytotoxicities. The charge-reversal mutants E349K and D352K do not translocate their fragment A to the cytosol, whereas D352N is partially competent. ADP-ribosyltransferase activity of fragment A is not required for translocation. Novel fragments of DT with apparent molecular masses of 28 and 35 kDa were detected in endocytic vesicles. The 28-kDa fragment consists of fragment A and an N-terminal piece of fragment B, whereas the 35-kDa fragment contains part of fragment B and may be complementary to the 28-kDa fragment. Time course studies show that the 28-kDa fragment appears in endocytic vesicles prior to translocation of fragment A to the cytosol, raising the possibility that the 28-kDa fragment is an intermediate in translocation. We present a model for translocation of fragment A that incorporates the observations made using the novel permeabilization method.
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