Phosphopeptide enrichment with TiO2-modified membranes and investigation of tau protein phosphorylation.
Phosphopeptide enrichment with TiO2-modified membranes and investigation of tau protein phosphorylation.
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DOI：
10.1021/ac400198n
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发表时间：
2013-06-18
影响因子：
7.4
通讯作者：
Bruening, Merlin L.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tan, Yu-Jing;Sui, Dexin;Wang, Wei-Han;Kuo, Min-Hao;Reid, Gavin E.;Bruening, Merlin L.
在进行质谱 (MS) 分析之前对磷酸肽进行选择性富集对于识别参与细胞调节的蛋白质磷酸化位点至关重要。这项研究描述了用 TiO2 纳米粒子对多孔尼龙基材进行修饰，以创建可快速富集磷酸肽的膜。直径为 22 毫米的膜可结合 540 nmol 的磷酸血管紧张素，并回收与 15 倍过量的非磷酸化蛋白质混合的 70% 的磷酸肽。纯磷酸肽的回收率为 90%。将小膜片插入 HPLC 配件中，可以快速富集 5 mL 的 1 fmol/μL 磷蛋白消化物，并浓缩成小体积（10 μL）洗脱液。膜富集与串联质谱相结合揭示了体内磷酸化 tau (p-tau) 蛋白的七个磷酸化位点，该蛋白与阿尔茨海默氏病相关。
Selective enrichment of phosphopeptides prior to their analysis by mass spectrometry (MS) is vital for identifying protein phosphorylation sites involved in cellular regulation. This study describes modification of porous nylon substrates with TiO2 nanoparticles to create membranes that rapidly enrich phosphopeptides. Membranes with a 22-mm diameter bind 540 nmol of phosphoangiotensin and recover 70% of the phosphopeptides in mixtures with a 15-fold excess of non-phosphorylated proteins. Recovery is 90% for a pure phosphopeptide. Insertion of small membrane disks into HPLC fittings allows rapid enrichment of 5 mL of 1 fmol/μL phosphoprotein digests and concentration into small-volume (10’s of μL) eluates. The combination of membrane enrichment with tandem mass spectrometry reveals seven phosphorylation sites from in vivo phosphorylated tau (p-tau) protein, which is associated with Alzheimer’s disease.
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