Analysis of the interactions of viral and cellular factors with human cytomegalovirus lytic origin of replication, oriLyt.
Analysis of the interactions of viral and cellular factors with human cytomegalovirus lytic origin of replication, oriLyt.
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DOI：
10.1016/j.virol.2011.12.010
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发表时间：
2012-03-15
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Pari GS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kagele D;Rossetto CC;Tarrant MT;Pari GS
人巨细胞病毒瞬时裂解DNA复制依赖于顺式作用元件oriLyt、6个病毒编码的核心蛋白、提出的DNA复制启动蛋白UL84、IE2、IRS1以及UL112/113位点的基因产物。为了阐明可能在oriLyt依赖性复制中发挥作用的细胞和病毒编码因子，我们使用DNA亲和纯化和质谱技术分离和鉴定了几种先前未知的与HCMV oriLyt DNA相互作用的细胞和病毒因子。这些蛋白包括多功能hnRNP-K、BUB3、HMGB1、PTB-1、UL83、UL112/113和IRS1。染色质免疫沉淀（ChIP）测定证实了这些因素中的几个与oriLyt的相互作用。在感染细胞和转染细胞中，共免疫沉淀实验检测到UL84和hnRNP-K之间的相互作用。通过siRNA敲低hnRNP K的表达抑制oriLyt的瞬时扩增。综上所述，这些数据表明，在DNA复制中，一些先前未被识别的病毒和细胞因子可能具有调控作用。
Human cytomegalovirus transient lytic DNA replication relies on the cis-acting element oriLyt, six viral-encoded core proteins, the proposed DNA replication initiator protein UL84, IE2, IRS1 and the gene products from the UL112/113 loci. In an effort to elucidate cellular and viral-encoded factors that may play a role in oriLyt-dependent replication we used DNA-affinity purification and mass spectrometry to isolate and identify several previously unknown cellular and viral factors that interact with HCMV oriLyt DNA. These proteins include the multifunctional hnRNP-K, BUB3, HMGB1, PTB-1, UL83, UL112/113, and IRS1. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) assays confirmed an interaction of several of these factors with oriLyt. Co-immunoprecipitation experiments detected an interaction between UL84 and hnRNP-K in infected and transfected cells. Knockdown of hnRNP K expression by siRNA inhibited the amplification of oriLyt in the transient assay. Together, these data suggest a possible regulatory role in DNA replication for several previously unidentified viral and cellular factors.
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