Conserved Furin Cleavage Site Not Essential for Secretion and Integration of ZP3 into the Extracellular Egg Coat of Transgenic Mice
Conserved Furin Cleavage Site Not Essential for Secretion and Integration of ZP3 into the Extracellular Egg Coat of Transgenic Mice
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保守的弗林蛋白酶切割位点对于 ZP3 分泌和整合到转基因小鼠细胞外蛋壳中不是必需的
DOI：
--
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发表时间：
2002
影响因子：
5.3
通讯作者：
J. Dean
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ming Zhao;L. Gold;A. Ginsberg;L. Liang;J. Dean
摘要哺乳动物卵细胞外透明带是由ZP1、ZP2和ZP3糖蛋白相互作用形成的。缺乏ZP2或ZP3的雌性小鼠不会形成稳定的小带基质，因此是不育的。这三种透明带蛋白是在发育中的卵母细胞中合成的，并在结合到透明带之前分泌。在每个跨膜结构域的上游靠近羧基末端的一个保守的Furin位点与卵母细胞的带外通域的释放有关。然而，Furin位点的突变(RnRRZP3ANAA)并不影响增强的绿色荧光蛋白(→)-ZP3融合蛋白在异源体细胞中的细胞内转运或分泌。在发育中的卵母细胞中瞬时表达后，正常的EGFP-ZP3和突变的EGFP-ZP3结合在透明带的内侧，这与质膜不同。这些体外结果在表达EGFP-ZP3的转基因小鼠中得到了证实，无论是否带有突变的Furin位点。在每种情况下，EGFP-ZP3都被整合到整个透明带的宽度，转基因小鼠是可生育的。这些结果表明，透明带基质是由内向外聚集的，并且出人意料地表明，在FURIN位置的切割不是形成小鼠卵子周围的细胞外透明带所必需的。
ABSTRACT The extracellular zona pellucida surrounding mammalian eggs is formed by interactions of the ZP1, ZP2, and ZP3 glycoproteins. Female mice lacking ZP2 or ZP3 do not form a stable zona matrix and are sterile. The three zona proteins are synthesized in growing oocytes and secreted prior to incorporation into the zona pellucida. A well-conserved furin site upstream of a transmembrane domain near the carboxyl terminus of each has been implicated in the release of the zona ectodomains from oocytes. However, mutation of the furin site (RNRR → ANAA) does not affect the intracellular trafficking or secretion of an enhanced green fluorescent protein (EGFP)-ZP3 fusion protein in heterologous somatic cells. After transient expression in growing oocytes, normal EGFP-ZP3 and mutant EGFP-ZP3 associate with the inner aspect of the zona pellucida, which is distinct from the plasma membrane. These in vitro results are confirmed in transgenic mice expressing EGFP-ZP3 with or without the mutant furin site. In each case, EGFP-ZP3 is incorporated throughout the width of the zona pellucida and the transgenic mice are fertile. These results indicate that the zona matrix accrues from the inside out and, unexpectedly, suggest that cleavage at the furin site is not required for formation of the extracellular zona pellucida surrounding mouse eggs.
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