Characterization of G Family G Proteins G (G), G (G), and G Expressed in the Baculovirus-Insect Cell System (*)
Characterization of G Family G Proteins G (G), G (G), and G Expressed in the Baculovirus-Insect Cell System (*)
复制标题
杆状病毒-昆虫细胞系统中表达的 G 家族 G 蛋白 G (G)、G (G) 和 G 的表征 (*)
DOI：
10.1074/jbc.270.11.6246
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发表时间：
1995
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
U. Kikkawa
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
F. Nakamura;Mariko Kato;K. Kameyama;T. Nukada;T. Haga;H. Kato;T. Takenawa;U. Kikkawa
利用杆状病毒系统在昆虫细胞中表达Gq家族G蛋白的α亚基Gα（G14α）、Gα（Gα）和Gqα与G蛋白β1和2亚基。用1%胆酸钠溶解G蛋白的三聚体G（Gαβ）、G（Gαβ）和Gq（Gqαβ），并在三种柱上连续层析纯化。G、G和Gq在氟化铝存在下以相同程度激活从牛脑纯化的磷脂酶C-β。在类似浓度的氨甲酰胆碱存在下，毒蕈碱型乙酰胆碱受体m1亚型刺激鸟苷5′-O-（3-硫代三磷酸）（GTPS）与G、G和Gq的结合。当m1受体、G蛋白和磷脂酶C-β在脂质囊泡中重构时，Gq家族G蛋白的每种亚型在1 μM GTPS或1 mM GTP存在下介导氨甲酰胆碱对磷脂酶C-β的激活。在m1受体和氨甲酰胆碱存在下，磷脂酶C-β刺激G、G和Gq的GT3活性，但不刺激Go的GT3活性。蛋白激酶C磷酸化m1受体和磷脂酶C-β，但磷酸化并不显著影响纯化蛋白重构体系中m1受体刺激磷脂酶C-β的能力。
The α subunits of Gq family G proteins, Gα(G14α), Gα(Gα), and Gqα were expressed with G protein β1 and 2 subunits in insect cells using a baculovirus system. The trimeric forms of G proteins, G (Gαβ), G (Gαβ), and Gq (Gqαβ), were solubilized by 1% sodium cholate and purified by sequential chromatography on three kinds of columns. G, G, and Gq activated phospholipase C-β purified from bovine brain in the presence of aluminum fluoride to the same extent. Muscarinic acetylcholine receptor m1 subtype stimulated the guanosine 5′-O-(3-thiotriphosphate) (GTPS) binding to G, G, and Gq in the presence of similar concentrations of carbamylcholine. When m1 receptor, G protein, and phospholipase C-β were reconstituted in lipid vesicles, each subtype of Gq family G proteins mediated the activation of phospholipase C-β by carbamylcholine in the presence of either 1 μM GTPS or 1 mM GTP. Phospholipase C-β stimulated the GTPase activity of G, G, and Gq in the presence of m1 receptor and carbamylcholine but did not stimulate the GTPase activity of Go. Protein kinase C phosphorylated m1 receptor and phospholipase C-β, but the phosphorylation did not significantly affect the ability of the m1 receptor to stimulate phospholipase C-β in the reconstitution system of purified proteins.
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DOI：
--
发表时间：
1993-07
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
J. Hepler;T. Kozasa;A. Smrcka;Melvin I. Simon;S. Rhee;P. Sternweis;A. Gilman
通讯作者：
J. Hepler;T. Kozasa;A. Smrcka;Melvin I. Simon;S. Rhee;P. Sternweis;A. Gilman
影响因子：
56.9
作者：
SMRCKA, AV;HEPLER, JR;STERNWEIS, PC
通讯作者：
STERNWEIS, PC
DOI：
10.1073/pnas.87.23.9113
发表时间：
1990-12-01
影响因子：
11.1
作者：
STRATHMANN, M;SIMON, MI
通讯作者：
SIMON, MI
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)41962-x
发表时间：
1992-08
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
C. Lee;D. Park;Dianqing Wu;S. Rhee;Melvin I. Simon
通讯作者：
C. Lee;D. Park;Dianqing Wu;S. Rhee;Melvin I. Simon
非洲爪蟾卵母细胞中受体诱发的 Cl- 电流是通过 β 型磷脂酶 C 介导的。该酶新形式的克隆。
DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Ma,HW;Blitzer,RD;Healy,EC;Premont,RT;Landau,EM;Iyengar,R
通讯作者：
Iyengar,R