CLICK: one-step generation of conditional knockout mice.
CLICK: one-step generation of conditional knockout mice.
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DOI：
10.1186/s12864-018-4713-y
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发表时间：
2018-05-02
期刊：
影响因子：
4.4
通讯作者：
Mashimo T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Miyasaka Y;Uno Y;Yoshimi K;Kunihiro Y;Yoshimura T;Tanaka T;Ishikubo H;Hiraoka Y;Takemoto N;Tanaka T;Ooguchi Y;Skehel P;Aida T;Takeda J;Mashimo T
CRISPR/Cas9能够靶向合子中的基因;然而，创建loxP侧翼（floxed）等位基因的有效方法仍然难以捉摸。在这里，我们展示了将Cas9、两种gRNA和长单链DNA（lssDNA）电穿孔到受精卵中，称为CLICK（具有诱导条件性敲除等位基因的lssDNA的CRISPR），使得能够在小鼠和大鼠中快速生成floxed等位基因。CLICK的高效率在携带组织特异性Cre的卵母细胞中提供纯合敲入，这允许在创始者（F0）小鼠中一步产生条件性敲除。本文的在线版本（10.1186/s12864-018-4713-y）包含补充材料，可供授权用户使用。
CRISPR/Cas9 enables the targeting of genes in zygotes; however, efficient approaches to create loxP-flanked (floxed) alleles remain elusive. Here, we show that the electroporation of Cas9, two gRNAs, and long single-stranded DNA (lssDNA) into zygotes, termed CLICK (CRISPR with lssDNA inducing conditional knockout alleles), enables the quick generation of floxed alleles in mice and rats. The high efficiency of CLICK provides homozygous knock-ins in oocytes carrying tissue-specific Cre, which allows the one-step generation of conditional knockouts in founder (F0) mice. The online version of this article (10.1186/s12864-018-4713-y) contains supplementary material, which is available to authorized users.
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影响因子：
64.5
作者：
Yang H;Wang H;Shivalila CS;Cheng AW;Shi L;Jaenisch R
通讯作者：
Jaenisch R
影响因子：
12.3
作者：
Quadros RM;Miura H;Harms DW;Akatsuka H;Sato T;Aida T;Redder R;Richardson GP;Inagaki Y;Sakai D;Buckley SM;Seshacharyulu P;Batra SK;Behlke MA;Zeiner SA;Jacobi AM;Izu Y;Thoreson WB;Urness LD;Mansour SL;Ohtsuka M;Gurumurthy CB
通讯作者：
Gurumurthy CB
影响因子：
64.8
作者：
Skarnes WC;Rosen B;West AP;Koutsourakis M;Bushell W;Iyer V;Mujica AO;Thomas M;Harrow J;Cox T;Jackson D;Severin J;Biggs P;Fu J;Nefedov M;de Jong PJ;Stewart AF;Bradley A
通讯作者：
Bradley A
影响因子：
48
作者：
Brown, Andrew J.;Fisher, Daniel A.;Cui, Xiaoxia
通讯作者：
Cui, Xiaoxia
通过核酸酶 Zygote 电穿孔进行高效 CRISPR/Cas9 介导的小鼠基因组编辑。
影响因子：
3.3
作者：
Qin W;Dion SL;Kutny PM;Zhang Y;Cheng AW;Jillette NL;Malhotra A;Geurts AM;Chen YG;Wang H
通讯作者：
Wang H