Protocol to quantify and characterize contact between T cells and antigen-presenting cells in the antigen-draining lymph nodes of mice using flow cytometry.
Protocol to quantify and characterize contact between T cells and antigen-presenting cells in the antigen-draining lymph nodes of mice using flow cytometry.
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DOI：
10.1016/j.xpro.2022.101845
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发表时间：
2022-12-16
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kumamoto, Yosuke
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tatsumi, Naoya;Davila-Pagan, Alejandro;Kumamoto, Yosuke
T 细胞和抗原呈递细胞 (APC) 之间的物理接触对于启动抗原特异性 T 细胞至关重要，但对抗原依赖性 T 细胞-APC 接触进行定量可能很费力。在这里，我们提出了一种基于流式细胞术的简单方案，用于定量卵清蛋白 (OVA) 免疫小鼠抗原引流淋巴结中 T 细胞-APC 接触。该协议量化了过继转移的 OVA 特异性 TCR 转基因 CD4T (OT-II) 细胞和树突状细胞 (DC) 亚群之间的接触。这种方法可应用于 T 细胞和 APC 之间其他类型的细胞间相互作用。有关该协议的使用和执行的完整详细信息，请参阅 Tatsumi 等人。 （2021）。量化 T 细胞和 APC 之间抗原依赖性接触的简单程序 识别 T 细胞启动过程中与 T 细胞相互作用的 APC 亚群 基于流式细胞术的方法可以同时分析多个样本 T 细胞转移到免疫小鼠和淋巴结收获的步骤 出版商注：进行任何实验方案都需要遵守当地实验室安全和道德机构指南。 T 细胞和抗原呈递细胞 (APC) 之间的物理接触对于启动抗原特异性 T 细胞至关重要，但对抗原依赖性 T 细胞-APC 接触进行定量可能很费力。在这里，我们提出了一种基于流式细胞术的简单方案，用于定量卵清蛋白 (OVA) 免疫小鼠抗原引流淋巴结中 T 细胞-APC 接触。该协议量化了过继转移的 OVA 特异性 TCR 转基因 CD4T 细胞和树突状细胞 (DC) 子集之间的接触。这种方法可应用于 T 细胞和 APC 之间其他类型的细胞间相互作用。
Physical contact between T cells and antigen-presenting cells (APCs) is essential for priming antigen-specific T cells, but quantitating the antigen-dependent T cell-APC contact can be laborious. Here, we present a simple flow-cytometry-based protocol for quantitating T cell-APC contacts in the antigen-draining lymph node in mice immunized with ovalbumin (OVA). This protocol quantifies the contact between adoptively transferred OVA-specific TCR transgenic CD4T (OT-II) cells and dendritic cell (DC) subsets. This approach can be applied to other types of intercellular interactions between T cells and APCs. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Tatsumi et al. (2021). A simple procedure to quantify antigen-dependent contacts between T cells and APCs Identification of APC subsets interacting with T cells during T cell priming Flow-cytometry-based approach allows to analyze multiple samples simultaneously Steps for T cell transfer to immunized mice and lymph node harvesting Publisher’s note: Undertaking any experimental protocol requires adherence to local institutional guidelines for laboratory safety and ethics. Physical contact between T cells and antigen-presenting cells (APCs) is essential for priming antigen-specific T cells, but quantitating the antigen-dependent T cell-APC contact can be laborious. Here, we present a simple flow-cytometry-based protocol for quantitating T cell-APC contacts in the antigen-draining lymph node in mice immunized with ovalbumin (OVA). This protocol quantifies the contact between adoptively transferred OVA-specific TCR transgenic CD4T cells and dendritic cell (DC) subsets. This approach can be applied to other types of intercellular interactions between T cells and APCs.
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