Detection of monkeypox virus with real-time PCR assays.
Detection of monkeypox virus with real-time PCR assays.
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DOI：
10.1016/j.jcv.2006.03.012
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发表时间：
2006-07
影响因子：
8.8
通讯作者：
Damon, Inger K.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Li, Yu;Olson, Victoria A.;Laue, Thomas;Laker, Miriam T.;Damon, Inger K.
人猴痘是一种人畜共患疾病，于2003年美国爆发期间首次在非洲以外地区报告。我们提出了两个实时PCR检测关键的实验室诊断猴痘在2003年美国爆发。基于TaqMan的检测试剂（E9 L-NVAR）靶向正痘病毒DNA聚合酶基因，并检测除天花病毒外的欧亚正痘病毒。利用MGB Eclipse™（Epoch Biosciences）探针的杂交测定靶向包膜蛋白基因（B6 R）并特异性检测猴痘病毒（MPXV）。使用编码的正痘病毒DNA样本对检测进行了验证，并用于评价来自5例确诊的美国猴痘病例的病变样本。E9 L-NVAR没有检测到天花（48株），北美正痘病毒（2）或来自非痘病毒皮疹疾病的DNA。该试验可重复地鉴定13种欧亚正痘病毒株的各种浓度，并对12.5个牛痘基因组敏感。B6 R检测识别了15种不同的MPXV菌株，而其他正痘病毒（9）和细菌（15）菌株没有交叉反应。在从确诊病例中检测的13份人类样本中，两种检测方法均鉴定出100%含有MPXV DNA。E9 L-NVAR和B6 R检测试剂分别对非天花欧亚正痘病毒和MPXV显示100%特异性。使用两个离散的病毒基因靶点，这些检测一起提供了一种快速确认猴痘感染的可靠和灵敏的方法。
Human monkeypox, a zoonotic disease, was first reported outside of Africa during the 2003 US outbreak. We present two real-time PCR assays critical for laboratory diagnosis of monkeypox during the 2003 US outbreak. A TaqMan-based assay (E9L-NVAR) targets the orthopoxvirus DNA polymerase gene and detects Eurasian orthopoxviruses other than Variola. A hybridization assay, utilizing a MGB Eclipse™ (Epoch Biosciences) probe, targets an envelope protein gene (B6R) and specifically detects monkeypox virus (MPXV). Assays were validated using coded orthopoxvirus DNA samples and used to evaluate lesion samples from five confirmed US monkeypox cases. E9L-NVAR did not detect variola (48 strains), North American orthopoxviruses (2), or DNA derived from non-poxviral rash illnesses. The assay reproducibly identified various concentrations of 13 Eurasian orthopoxvirus strains and was sensitive to 12.5 vaccinia genomes. The B6R assay recognized 15 different MPXV strains, while other orthopoxvirus (9) and bacteria (15) strains did not cross-react. Of the 13 human samples tested from confirmed cases, both assays identified 100% as containing MPXV DNA. E9L-NVAR and B6R assays demonstrate 100% specificity for non-variola Eurasian orthopoxvirus and MPXV, respectively. Using two discrete viral gene targets, these assays together provide a reliable and sensitive method for quickly confirming monkeypox infections.
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