Analysis of myosin heavy chain mRNA expression by RT-PCR.
Analysis of myosin heavy chain mRNA expression by RT-PCR.
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通过 RT-PCR 分析肌球蛋白重链 mRNA 表达。
DOI：
10.1152/jappl.1997.83.4.1389
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发表时间：
1997
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Baldwin,KM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wright,C;Haddad,F;Qin,AX;Baldwin,KM
放大图片作者：Wright，Carola，Fadia Haddad，Anqi X. Qin，and Kenneth M. Baldwin.通过RT-PCR分析肌球蛋白重链mRNA表达.应用生理学杂志83（4）：1389-1396，1997.-建立了一种快速、灵敏地检测啮齿动物骨骼肌肌球蛋白重链（MHC）mRNA表达的方法。仅需2 μg总RNA即可同时分析6种不同MHC基因的相对mRNA表达。我们设计了合成的DNA片段作为内标，其包含成人MHC mRNA I、IIa、IIx、IIb型以及胚胎和新生儿MHC mRNA的相关引物序列。将已知量的合成片段加入到每个聚合酶链反应（PCR）中，并产生与扩增的MHC mRNA片段大小不同的产物。扩增的MHC片段与合成片段的比率允许我们计算给定肌肉样品中不同MHC基因的基因表达百分比。与传统的北方印迹分析的比较表明，我们的逆转录酶-PCR为基础的分析是可靠的，快速的，定量的相对MHC mRNA的表达在很宽的范围内的频谱的成年和新生大鼠骨骼肌。此外，该测定的高灵敏度使得其在只有少量组织可用时非常有用。跨分析样品的每种MHC同种型的信号的统计分析显示PCR和北方信号之间高度显著的相关性，因为Pearson相关系数在0.77和0.96之间（P< 0.005）。该测定在分析小肌肉样品如活检和来自发育前和/或新生儿阶段的样品中具有潜在用途。
Wright, Carola, Fadia Haddad, Anqi X. Qin, and Kenneth M. Baldwin.Analysis of myosin heavy chain mRNA expression by RT-PCR.J. Appl. Physiol.83(4): 1389–1396, 1997.—An assay was developed for rapid and sensitive analysis of myosin heavy chain (MHC) mRNA expression in rodent skeletal muscle. Only 2 μg of total RNA were necessary for the simultaneous analysis of relative mRNA expression of six different MHC genes. We designed synthetic DNA fragments as internal standards, which contained the relevant primer sequences for the adult MHC mRNAs type I, IIa, IIx, IIb as well as the embryonic and neonatal MHC mRNAs. A known amount of the synthetic fragment was added to each polymerase chain reaction (PCR) and yielded a product of different size than the amplified MHC mRNA fragment. The ratio of amplified MHC fragment to synthetic fragment allowed us to calculate percentages of the gene expression of the different MHC genes in a given muscle sample. Comparison with the traditional Northern blot analysis demonstrated that our reverse transcriptase-PCR-based assay was reliable, fast, and quantitative over a wide range of relative MHC mRNA expression in a spectrum of adult and neonatal rat skeletal muscles. Furthermore, the high sensitivity of the assay made it very useful when only small quantities of tissue were available. Statistical analysis of the signals for each MHC isoform across the analyzed samples showed a highly significant correlation between the PCR and the Northern signals as Pearson correlation coefficients ranged between 0.77 and 0.96 (P< 0.005). This assay has potential use in analyzing small muscle samples such as biopsies and samples from pre- and/or neonatal stages of development.
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通讯作者：
Baldwin,KM