High-sensitivity real-time imaging of dual protein-protein interactions in living subjects using multicolor luciferases.
High-sensitivity real-time imaging of dual protein-protein interactions in living subjects using multicolor luciferases.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0005868
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发表时间：
2009-06-12
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Ozawa T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hida N;Awais M;Takeuchi M;Ueno N;Tashiro M;Takagi C;Singh T;Hayashi M;Ohmiya Y;Ozawa T
蛋白质-蛋白质相互作用网络在活体中许多重要的生物过程中发挥着关键作用。评估活细胞中蛋白质-蛋白质相互作用的有效方法是蛋白质片段补体分析(PCA)。特别是，使用荧光蛋白的分析是强大的技术，但由于其不可逆性或生色团形成的时间，它们不能直接跟踪相互作用。相比之下，使用生物发光蛋白的多氯联苯可以克服这些缺点。在此，我们描述了一种使用具有不同光谱特征的多色荧光素酶来实时分析蛋白质-蛋白质相互作用的成像方法。通过开发甲虫荧光素酶的羧基末端片段，大大提高了灵敏度和信号背景比。我们证明了它在非洲爪哇单个活体胚胎早期发育阶段Smad1-Smad4和Smad2-Smad4相互作用的时空特征中的有效性。我们还通过在细胞培养和活着的小鼠中应用特定的蛋白质-蛋白质相互作用来描述这种方法的价值。这项技术支持对不透明或强自动荧光活体受试者中具有选择性发光波长的多种蛋白质-蛋白质相互作用的定量分析和成像。
Networks of protein-protein interactions play key roles in numerous important biological processes in living subjects. An effective methodology to assess protein-protein interactions in living cells of interest is protein-fragment complement assay (PCA). Particularly the assays using fluorescent proteins are powerful techniques, but they do not directly track interactions because of its irreversibility or the time for chromophore formation. By contrast, PCAs using bioluminescent proteins can overcome these drawbacks. We herein describe an imaging method for real-time analysis of protein-protein interactions using multicolor luciferases with different spectral characteristics. The sensitivity and signal-to-background ratio were improved considerably by developing a carboxy-terminal fragment engineered from a click beetle luciferase. We demonstrate its utility in spatiotemporal characterization of Smad1–Smad4 and Smad2–Smad4 interactions in early developing stages of a single living Xenopus laevis embryo. We also describe the value of this method by application of specific protein-protein interactions in cell cultures and living mice. This technique supports quantitative analyses and imaging of versatile protein-protein interactions with a selective luminescence wavelength in opaque or strongly auto-fluorescent living subjects.
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影响因子：
15
作者：
Magliery, TJ;Wilson, CGM;Regan, L
通讯作者：
Regan, L
DOI：
10.1073/pnas.242594299
发表时间：
2002-11-26
影响因子：
11.1
作者：
Paulmurugan, R;Umezawa, Y;Gambhir, SS
通讯作者：
Gambhir, SS
影响因子：
7.4
作者：
Ozawa, T;Kaihara, A;Umezawa, Y
通讯作者：
Umezawa, Y
影响因子：
48
作者：
Remy, Ingrid;Michnick, Stephen W.
通讯作者：
Michnick, Stephen W.
影响因子：
3.6
作者：
Mervine, Stacy M.;Yost, Evan A.;Berlot, Catherine H.
通讯作者：
Berlot, Catherine H.