The MgATP-binding site on chicken gizzard myosin light chain kinase remains open and functionally competent during the calmodulin-dependent activation-inactivation cycle of the enzyme.
The MgATP-binding site on chicken gizzard myosin light chain kinase remains open and functionally competent during the calmodulin-dependent activation-inactivation cycle of the enzyme.
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鸡砂囊肌球蛋白轻链激酶上的 MgATP 结合位点在酶的钙调蛋白依赖性激活-失活循环期间保持开放且功能正常。
DOI：
10.1021/bi00138a022
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发表时间：
1992
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Marchand,P
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kennelly,PJ;Leng,J;Marchand,P
修订稿于 1992 年 3 月 26 日收到摘要：使用类 ATP 亲和标记试剂 5'-[p-(氟磺酰基)苯甲酰基]腺苷 (FSBA) 来探测鸡砂囊平滑肌肌球蛋白轻链激酶 (smMLCK) 及其钙调蛋白 (CaM) 复合物的 MgATP 结合位点。 NativesmMLCK 绝对需要结合 CaM 的钙复合物才能表达其催化活性。 FSBA 与 smMLCK-CaM 以及不含 CaM 的无活性酶发生反应。两种反应均取决于时间和 FSBA 浓度。反应伴随着共价结合的 [14C] FSBA 以约 1:1 的摩尔比掺入 smMLCK 蛋白中，在每种情况下，对（氟磺酰基）苯甲酸（缺乏腺苷靶向基团的 FSBA 类似物）不会以显着速率与任一形式的 smMLCK 发生反应。无 CaM 和结合 CaM 的 smMLCK 与 FSBA 的反应显示出饱和动力学。 smMLCK 和 smMLCK-CaM 的可逆非共价酶-FSBA 复合物转化为不可逆抑制共价修饰酶的一级速率常数相似，分别为 0.15 和 0.07 min"1。产生半最大灭活速率 Kh 的 FSBA 浓度基本相同，对于 smMLCK 和 smMLCK 分别为 0.65 和 0.64 mM。 smMLCK-CaM，但不是 MgGTP 或底物肽，与 FSBA 的抑制反应是竞争性的。对于 smMLCK 和 smMLCK-CaM，测得的 MgATP 抑制常数基本上相同，即 33 µ 和 34 µ，因此，当酶解离后，smMLCK 上的 MgATP 结合位点仍然是可接近和可识别的。钙调。
Revised Manuscript Received March 26, 1992 abstract: An ATP-like affinity labeling reagent, 5'-[p-(fluorosulfonyl) benzoyl] adenosine (FSBA), was used toprobe the MgATP-binding site of smooth muscle myosin light chain kinase from chicken gizzard (smMLCK) and itscalmodulin (CaM) complex. NativesmMLCK has an absolute requirementfor the binding of the calcium complex of CaM for expression of its catalytic activity. FSBA reacted with smMLCK-CaM and with the CaM-free, inactive enzyme as well. Both reactions were dependent on time and FSBA concentration. Reaction was accompanied by the incorporation of covalently bound [14C] FSBA into smMLCK protein at a molar ratio of approximately 1: 1 in each case, p-(Fluorosulfonyl) benzoic acid, an analogue of FSBA lacking the adenosine targeting group, did not react at a significant rate with either form of smMLCK. Reaction of CaM-free and CaM-bound smMLCK with FSBA displayed saturation kinetics. The first-order rate constants for the conversion of the reversible, noncovalent enzyme-FSBA complex toform the irreversibly inhibited, covalently modified enzyme were similar for both smMLCK and smMLCK-CaM, 0.15 and 0.07 min" 1, respectively. The concentrations of FSBAyielding the halfmaximal rate of inactivation, Kh were essentially identical—0.65 and 0.64 mM, respectively—for smMLCK and smMLCK-CaM. MgATP, but not MgGTP or a substrate peptide, potentlyinhibited reaction with FSBA. Inhibition by MgATP was competitive. The measured inhibitory constant for MgATP was essentially the same—33 versus 34 µ—for both smMLCK and smMLCK-CaM. It therefore is concluded that the MgATP-binding site on smMLCK remains accessible and recognizable as such when the enzyme becomes inactivated upon dissociation of CaM.
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DOI：
--
发表时间：
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影响因子：
--
作者：
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通讯作者：
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10.1073/pnas.87.6.2284
发表时间：
1990-03-01
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11.1
作者：
OLSON, NJ;PEARSON, RB;MEANS, AR
通讯作者：
MEANS, AR
影响因子：
4.8
作者：
P. Kennelly;A. Edelman;D. Blumenthal;E. Krebs
通讯作者：
E. Krebs