A novel system for convenient detection of low‐affinity receptor–ligand interactions: Chelator‐lipid liposomes engrafted with recombinant CD4 bind to cells expressing MHC class II
A novel system for convenient detection of low‐affinity receptor–ligand interactions: Chelator‐lipid liposomes engrafted with recombinant CD4 bind to cells expressing MHC class II
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一种方便检测低亲和力受体-配体相互作用的新系统：植入重组 CD4 的螯合脂质脂质体与表达 MHC II 类的细胞结合
DOI：
10.1046/j.1440-1711.2001.01010.x
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发表时间：
2001
影响因子：
4
通讯作者：
J. Altin
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Christina L. van Broekhoven;J. Altin
细胞表面受体与其配体的相互作用对于启动许多免疫应答至关重要，通常通过受体二聚化/寡聚化以及通过一个细胞上的受体与其配体或并列细胞上的同源受体之间的多聚体相互作用来稳定。然而，目前研究受体-配体相互作用的技术并不总是允许受体横向移动以实现二聚化/寡聚化，或与细胞表面上的配体多聚化相互作用。由于这些原因，低亲和力受体-配体相互作用的检测一直是困难的。利用一种新型的螯合剂-脂质，氨三乙酸二十四烷基胺（NTA-DTDA），我们开发了一种方便的脂质体系统，用于直接检测低亲和力受体-配体相互作用。我们使用重组可溶形式的鼠CD 40和B7.1以及鼠和人CD 4（各自具有六组氨酸标签）进行的研究表明，这些蛋白质可以通过与NTA-DTDA的金属螯合键直接锚定或“嫁接”到荧光标记的脂质体上，使它们能够与细胞上的配体进行二聚化/寡聚化和多聚化结合。荧光激活细胞分选仪（FACS）分析表明，尽管可溶性形式的鼠CD 40和B7.1以及鼠和人CD 4与细胞的结合很少（如果有），但植入的脂质体特异性结合表达适当同源受体的细胞，通常产生比对照细胞高4-6倍的荧光。这种脂质体可以直接检测鼠CD 40和B7.1分别与表达CD 154和CD 28的细胞的低亲和力相互作用，以及CD 4与MHC II类的相互作用，迄今为止，除了通过突变分析和mAb阻断研究外，这种相互作用无法直接检测。
The interactions of cell surface receptors with their ligands, crucial for initiating many immunological responses, are often stabilized by receptor dimerization/oligomerization, and by multimeric interactions between receptors on one cell with their ligands or cognate receptors on the apposing cell. Current techniques for studying receptor–ligand interactions, however, do not always allow receptors to move laterally to enable dimerization/ oligomerization, or to interact multimerically with ligands on cell surfaces. For these reasons detection of low‐ affinity receptor–ligand interactions has been difficult. Utilizing a novel chelator‐lipid, nitrilotriacetic acid di‐tetradecylamine (NTA‐DTDA), we have developed a convenient liposome system for directly detecting low‐affinity receptor–ligand interactions. Our studies using recombinant soluble forms of murine CD40 and B7.1, and murine and human CD4, each possessing a hexhistidine tag, showed that these proteins can be anchored or ‘engrafted’ directly onto fluorescently labelled liposomes via a metal‐chelating linkage with NTA‐DTDA, permitting them to undergo dimerization/oligomerization and multimeric binding with ligands on cells. Fluorescence‐ activated cell sorter (FACS) analyses demonstrated that while there is little if any binding of soluble forms of murine CD40 and B7.1, and murine and human CD4 to cells, engrafted liposomes bind specifically to cells expressing the appropriate cognate receptor, often giving a fluorescence 4–6‐fold above control cells. Such liposomes could detect directly the low‐affinity interaction of murine CD40 and B7.1 with CD154‐ and CD28‐expressing cells, respectively, and the interaction of CD4 with MHC Class II, which has hitherto defied direct detection except through mutational analysis and mAb blocking studies.
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Sakihama,T;Smolyar,A;Reinherz,EL
通讯作者：
Reinherz,EL