Studying nuclear disassembly in vitro using Xenopus egg extract.
Studying nuclear disassembly in vitro using Xenopus egg extract.
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使用非洲爪蟾卵提取物研究体外核分解。
DOI：
10.1016/j.ymeth.2006.06.004
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发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Prunuske,AmyJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Higa,MedaM;Ullman,KatharineS;Prunuske,AmyJ
非洲爪蟾卵提取物提供了一个非常强大的方法，在细胞周期调控方面的核形式和功能的研究。每个卵子都含有足够的膜和蛋白质成分，以支持多轮细胞分裂。值得注意的是，在存在能量再生系统的情况下，卵提取物与DNA的孵育足以诱导DNA周围的核膜的形成。此外，这些体外细胞核含有功能性核孔复合物，其从头形成并能够支持核质转运。有丝分裂进入可以通过向间期提取物中加入重组细胞周期蛋白来诱导。这引发了导致细胞核解体的信号传导。因此，这种无细胞系统可用于破译核被膜的有丝分裂重塑中涉及的事件，如核孔渗透性的变化、膜的分散和纤层的解体。策划这些事件所需的一般机制和个体参与者都可以通过对鸡蛋提取物的生化操作来识别。在这里，我们描述了一个程序的组装和拆卸的体外细胞核，包括非洲爪蟾卵提取物和精子染色质DNA的生产。
Xenopus egg extract provides an extremely powerful approach in the study of cell cycle regulated aspects of nuclear form and function. Each egg contains enough membrane and protein components to support multiple rounds of cell division. Remarkably, incubation of egg extract with DNA in the presence of an energy regeneration system is sufficient to induce formation of a nuclear envelope around DNA. In addition, these in vitro nuclei contain functional nuclear pore complexes, which form de novo and are capable of supporting nucleocytoplasmic transport. Mitotic entry can be induced by the addition of recombinant cyclin to an interphase extract. This initiates signaling that leads to disassembly of the nuclei. Thus, this cell-free system can be used to decipher events involved in mitotic remodeling of the nuclear envelope such as changes in nuclear pore permeability, dispersal of membrane, and disassembly of the lamina. Both general mechanisms and individual players required for orchestrating these events can be identified via biochemical manipulation of the egg extract. Here, we describe a procedure for the assembly and disassembly of in vitro nuclei, including the production of Xenopus egg extract and sperm chromatin DNA.
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--
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