The 14-3-3 protein PAR-5 regulates the asymmetric localization of the LET-99 spindle positioning protein.
The 14-3-3 protein PAR-5 regulates the asymmetric localization of the LET-99 spindle positioning protein.
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14-3-3 蛋白 PAR-5 调节 LET-99 纺锤体定位蛋白的不对称定位。
DOI：
10.1016/j.ydbio.2016.02.020
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发表时间：
2016
影响因子：
2.7
通讯作者：
Rose,LesileeS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wu,Jui-Ching;Espiritu,EugenelB;Rose,LesileeS
PAR 蛋白在建立细胞质极性以及在不对称分裂过程中调节纺锤体定位方面发挥着重要作用。然而，PAR 蛋白在不同细胞类型中产生不对称性的分子机制仍有待阐明。先前对秀丽隐杆线虫的研究表明，PAR-3和PAR-1调节LET-99的不对称定位，进而通过影响保守力产生复合物的分布来控制纺锤体定位。在野生型胚胎中，LET-99 通过 PAR-3 的前部抑制和 PAR-1 的后部抑制，定位于侧皮质带模式。在本报告中，我们表明 14-3-3 蛋白 PAR-5 也是皮质 LET-99 不对称所必需的。在 Pull-down 测定中 PAR-5 与 LET-99 相关，并且使用酵母双杂交测定在 LET-99 中鉴定了两个 PAR-5 结合位点。这些位点的突变消除了酵母中的结合并改变了 LET-99 在体内的定位：LET-99 在胚胎后极的含量最高，而不是在 par-5 胚胎中的条带。这些结果共同表明 PAR-5 与 PAR-1 共同作用，调节 LET-99 皮质定位。
PAR proteins play important roles in establishing cytoplasmic polarity as well as regulating spindle positioning during asymmetric division. However, the molecular mechanisms by which the PAR proteins generate asymmetry in different cell types are still being elucidated. Previous studies inCaenorhabditis elegansrevealed that PAR-3 and PAR-1 regulate the asymmetric localization of LET-99, which in turn controls spindle positioning by affecting the distribution of the conserved force generating complex. In wild-type embryos, LET-99 is localized in a lateral cortical band pattern, via inhibition at the anterior by PAR-3 and at the posterior by PAR-1. In this report, we show that the 14-3-3 protein PAR-5 is also required for cortical LET-99 asymmetry. PAR-5 associated with LET-99 in pull-down assays, and two PAR-5 binding sites were identified in LET-99 using the yeast two-hybrid assay. Mutation of these sites abolished binding in yeast and altered LET-99 localization in vivo: LET-99 was present at the highest levels at the posterior pole of the embryo instead of a band inpar-5embryos. Together the results indicate that PAR-5 acts in a mechanism with PAR-1 to regulate LET-99 cortical localization.
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