Large Scale Bacterial Colony Screening of Diversified FRET Biosensors.
Large Scale Bacterial Colony Screening of Diversified FRET Biosensors.
复制标题
DOI：
10.1371/journal.pone.0119860
复制
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Griesbeck O
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Litzlbauer J;Schifferer M;Ng D;Fabritius A;Thestrup T;Griesbeck O
基于荧光蛋白突变体之间的福斯特共振能量转移（FRET）的生物传感器已开始彻底改变生理学和生物化学。然而，许多类型的FRET生物传感器显示出相对较小的FRET变化，使得在次优实验条件下使用这些探针进行测量具有挑战性。因此，该领域目前的主要努力在于为这些类型的传感器设计新的优化策略。在这里，我们描述了优化FRET变化的程序，通过大规模筛选细菌菌落中的突变生物传感器库。我们描述了生物传感器表达的优化，细菌的透化，用于分析的软件工具和筛选条件。这里报告的程序可能有助于改善FRET变化在多个合适的类别的生物传感器。
Biosensors based on Förster Resonance Energy Transfer (FRET) between fluorescent protein mutants have started to revolutionize physiology and biochemistry. However, many types of FRET biosensors show relatively small FRET changes, making measurements with these probes challenging when used under sub-optimal experimental conditions. Thus, a major effort in the field currently lies in designing new optimization strategies for these types of sensors. Here we describe procedures for optimizing FRET changes by large scale screening of mutant biosensor libraries in bacterial colonies. We describe optimization of biosensor expression, permeabilization of bacteria, software tools for analysis, and screening conditions. The procedures reported here may help in improving FRET changes in multiple suitable classes of biosensors.
登录
查看更多内容
影响因子：
3.9
作者：
Campbell, Anthony K.;Naseern, Riffat;Wann, Kenneth T.
通讯作者：
Wann, Kenneth T.
影响因子：
4
作者：
Piljic, Alen;de Diego, Inaki;Schultz, Carsten
通讯作者：
Schultz, Carsten
DOI：
10.1073/pnas.0712008105
发表时间：
2008-03-18
影响因子：
11.1
作者：
Hires, Samuel Andrew;Zhu, Yongling;Tsien, Roger Y.
通讯作者：
Tsien, Roger Y.
DOI：
10.1073/pnas.96.5.2135
发表时间：
1999-03-02
影响因子：
11.1
作者：
Miyawaki, A;Griesbeck, O;Tsien, RY
通讯作者：
Tsien, RY
影响因子：
3.5
作者：
Ibraheem A;Yap H;Ding Y;Campbell RE
通讯作者：
Campbell RE