Extraction and long‐term storage of S‐layer proteins and flagella from Lysinibacillus sphaericus NCTC 9602: Building blocks for nanotechnology
Extraction and long‐term storage of S‐layer proteins and flagella from Lysinibacillus sphaericus NCTC 9602: Building blocks for nanotechnology
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从球形赖氨酸芽孢杆菌 NCTC 9602 中提取并长期储存 Sâlayer 蛋白和鞭毛：纳米技术的构建模块
DOI：
10.1002/elsc.201400182
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发表时间：
2015
影响因子：
2.7
通讯作者：
M. Mertig
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
A. Blüher;K. Ostermann;P. Jäckel;A. Clemens;B. Katzschner;G. Rödel;M. Mertig
细菌的自组装表面层（SL）蛋白已被广泛研究，特别是它们作为技术表面的分子定义的2D涂层的用途。一个重要的先决条件是有足够的蛋白质。然而，一个详细的和优化的协议，为完整的SL提取到目前为止还没有。在这里，我们描述了球形赖氨酸芽孢杆菌NCTC 9602的SL蛋白的完整纯化和重组过程，从细胞培养，SL蛋白的制备和纯化到蛋白的长期储存和体外自组装。该程序的所有关键步骤都通过不同的显微镜技术进行评估，例如光学显微镜，原子力显微镜和扫描电子显微镜以及作为生化方法的SDS-PAGE。我们证明，在叠氮化钠存在下或冻干后储存蛋白质可以保持自组装特性至少9年。此外，我们描述了一种方法，允许完整的鞭毛长度范围内的4 μm的提取。鞭毛可能在生物纳米技术中有应用，例如作为金属纳米线的模板。
Self‐assembling surface layer (SL) proteins of bacteria have been widely studied, in particular their use as molecularly defined, 2D coatings of technical surfaces. An important prerequisite is the availability of a sufficient amount of protein. However, a detailed and optimized protocol for the complete SL extraction is so far not available. Here, we describe the complete purification and reassembly procedure of an SL protein ofLysinibacillus sphaericusNCTC 9602, starting from the cultivation of cells, the preparation and purification of SL proteins up to the long‐term storage and in vitro self‐assembly of the proteins. All crucial steps of the procedure are assessed by different microscopic techniques, such as light microscopy, atomic force microscopy, and scanning electron microscopy as well as by SDS‐PAGE as a biochemical method. We demonstrate that storage of the protein in the presence of sodium azide or upon lyophilization allows the preservation of the self‐assembly properties for at least 9 years. Additionally, we describe a method allowing the extraction of intact flagella with lengths in the range up to 4 μm. Flagella may have applications in bio‐nanotechnology, for example as templates for metallic nanowires.
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DOI：
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2006
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Mertig, Michael
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Sleytr, U B
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