Isolation and Characterization of Both Human and Mouse Tfh/Tfr Cells
Isolation and Characterization of Both Human and Mouse Tfh/Tfr Cells
复制标题
人和小鼠 Tfh/Tfr 细胞的分离和表征
DOI：
10.1002/cpz1.283
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Wing James B.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tulyeu Janyerkye;Sondergaard Jonas N.;Sakaguchi Shimon;Wing James B.
表达转录因子Foxp3的调节性T细胞(Tregs)在调节免疫动态平衡方面起着关键作用。Treg亚群T滤泡调节细胞(TFR)具有进入B细胞滤泡和控制抗体反应的特殊功能。虽然TFR可以通过它们的蛋白质或基因表达谱来识别，但使用体外功能分析来确定它们的抑制能力对于进一步表征这些细胞是重要的。在这里，我们提出了从小鼠和人类中鉴定和纯化TFR的方法，然后与B细胞和T滤泡辅助细胞(TFH)共培养。然后，通过流式细胞仪检测Tfh依赖的B细胞类型转换和血浆母细胞形成的能力和酶联免疫吸附试验检测培养上清液中免疫球蛋白的产生来评估TFR的抑制活性。这些检测还将提供对任何孤立的TFR或Treg群体的功能抑制能力的深入表征。2021 Wiley期刊LLC.基本方案1：小鼠T滤泡调节细胞的分离基本方案2：小鼠T滤泡调节细胞抑制功能的测定基本方案3：人T滤泡调节细胞的分离基本方案4：人T滤泡调节细胞抑制功能的测定
Regulatory T cells (Tregs) expressing the transcription factor Foxp3 have a critical role for the control of immune homeostasis. The Treg subgroup T follicular regulatory cells (Tfr) have a specialized function to travel to the B cell follicle and control antibody responses. While Tfr may be identified by their protein or gene expression profiles, the use of in vitro functional assays to determine their suppressive capacity is important to further characterize these cells. Here we present methods for the identification and purification of Tfr from both mice and humans followed by co‐culture with B cells and T follicular helper cells (Tfh). The suppressive activity of the Tfr is then assessed by the ability to prevent Tfh‐dependent B cell class switching and plasma blast formation measured by flow cytometry and immunoglobulin production in culture supernatants measured by enzyme‐linked immunosorbent assay. These assays will also provide in‐depth characterization of the functional suppressive capacity of any isolated Tfr or Treg population. © 2021 Wiley Periodicals LLC.Basic Protocol 1: Isolation of murine T follicular regulatory cellsBasic Protocol 2: Measurement of murine T follicular regulatory cell suppressive functionBasic Protocol 3: Isolation of human T follicular regulatory cellsBasic Protocol 4: Measurement of human T follicular regulatory cell suppressive function
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